基于先天免疫模式识别受体研究补肾冲剂抗HBV的作用机制

补肾冲剂是治疗慢性乙型肝炎的有效验方,临床应用有抗炎、抗病毒作用，抑制HepG 2215细胞株HBV表达。既往研究证实先天肾气不足者，先天免疫存在异常。先天免疫是特异性免疫启动者，先天免疫模式识别受体(PRRs)识别病原体，启动并激活先天免疫与特异性免疫。乙肝病毒（HBV）阻抑PRRs活化，致先天免疫和特异性免疫低下，肝内持续炎症。鉴此，我们提出"补肾冲剂通过调节PRRs及相关抗病毒、炎性信号通路抗HBV"的假说。本课题应用HepG 2215细胞株研究补肾冲剂对与特异性免疫相关的PRRs基因（TLRs、RLRs、NLRs、ALRs、ZBPs）表达的影响；将PRRs激动剂和中药加入细胞培养基，检测IRF3/IRF7/I型干扰素抗病毒信号通路和NF-κB/TNFα及IL-β炎性信号通路的变化，研究补肾冲剂对PRRs抗病毒和炎性信号通路的调节作用，丰富慢乙肝"肾虚为本"中医病机理论的现代医学内涵

先天免疫是特异性免疫启动者，先天免疫模式识别受体(PRRs)识别病原体，启动并激活先天免疫与特异性免疫。乙肝病毒（HBV）阻抑PRRs 活化，致先天免疫和特异性免疫低下，肝内持续炎症。本课题应用HepG2.215细胞株研究补肾冲剂对与特异性免疫相关的PRRs基因（TLRs、RLRs、NLRs、ALRs、ZBPs）表达的影响；将PRRs 激动剂和中药加入细胞培养基，检测IRF3/IRF7/I 型干扰素抗病毒信号通路和NF-κ B/TNFα 及IL-β炎性信号通路的变化。研究结果发现：1. 补肾冲剂组TLRs中TLR3 mRNA、TLR4 mRNA、TLR7 mRNA、TLR9 mRNA表达均上调。TLR3及TLR4激动剂刺激下，补肾冲剂组细胞上清中的HBsAg和HBeAg分泌均下降，IFN-β以及TNF-α mRMA表达增加，且IRF-3表达明显高于对照组。TLR7及TLR9激动剂刺激下，补肾冲剂组IRF-7表达明显高于对照组。2. 补肾冲剂组RLRs中RIG-I受体、MDA5受体mRNA表达上调。8h时，加入聚肌胞的补肾冲剂药物血清组MAVs表达最高，且其pIRF-3为最高。3.补肾冲剂组NLRs中，NOD1 mRNA、NOD2受体mRNA、NLRC4 mRNA表达上调。NLRPs mRNA检测发现，补肾冲剂组NLRP1、NLRP2、NLRP10和 NLRP11mRNA表达上调，NLRP3 mRNA表达显著下调。NOD2受体激动剂刺激下,补肾方药物血清组IFN-β以及TNF-α mRMA均上调。研究结论：1. 补肾冲剂可以上调TLR（3、4、5、7、9、）、RIG-I、MDA5、 NLRP（4、10、11、12）、NOD（1、2）、ZBP1、NLRC4 mRNA表达，下调TLR6、NLRP（1、2、3）、LPG2 mRNA表达；2.模式识别受体激动剂刺激下，补肾冲剂能抑制HepG2.215细胞HBsAg、HBeAg的分泌，并且上调其IFN-β、TNF-α mRNA的表达，且上调TLR（3、4、7、9）、NOD2、RIG-I介导的I型干扰素信号通路干扰素调节因子（IRF-3/7、MAVS）的表达，并促进其磷酸化，下调NLRP3介导的IL-1β的表达。本项目共发表论文22篇，其中SCI论文5篇；获得省部级科研奖励5项；共培养硕士研究生1名。