雌激素样双向调节作用中药的体内化学成分多样性分析及谱效关系

大量实验研究表明, 很多中药具有雌激素样作用,并显示双向调节作用，然而由于活性成分不明确而把握不当，可能会起反向调节作用。从而限制了其应用和开发。课题针对雌激素样双向调节作用中药（肉苁蓉、菟丝子）的体内化学成分多样性分析及谱效关系进行研究，采用体外乳腺癌MCF7细胞增殖实验和测定体内E2、FSH、LH水平来评价中药的雌激素活性。根据产生的拟（抗）雌激素样作用，应用HPLC-PDA-ESI（APCI）MSn同步分析在血、尿及粪便中的原型成分及代谢产物，通过建立时-效、谱-效曲线，寻找化学成分谱与活性经时变化规律并分析其相关性，解析转化产物的代谢途径和代谢机制，旨在明确中药肉苁蓉、菟丝子雌激素样双向调节作用的化学成分群，为其临床应用、开发及质量控制提供科学的理论依据。

本项目对中药菟丝子、肉苁蓉的雌激素样双向调节作用中药的体内化学成分多样性分析及谱效关系进行了深入研究，完成以下六方面的工作：（1）采用体内、体外方法相结合确定菟丝子雌激素样作用的活性部位，建立20个不同产地菟丝子活性部位的指纹图谱，鉴别出22个成分。通过对菟丝子“谱-效”相关性的分析，其相关的成分可能为菟丝子发挥拟雌激素作用的物质基础。（2）在菟丝子拟雌激素活性部位给药后的血清中共鉴定出9个化学成分；尿液中共鉴定出12个化学成分；粪便中共鉴定出11个化学成分。以上研究结果对阐明菟丝子拟雌激素作用药效物质基础研究具有重要意义，最后采用D-101型大孔吸附树脂对菟丝子拟雌激素活性部位进行了分离纯化，为指导菟丝子进一步研究及临床上的应用提供了可靠依据。（3）检测到菟丝子雌激素拮抗作用有效部位共有20个化学成分，在大鼠体内共有12个入血成分；在尿液样品中共检测到13个代谢转化成分；在粪便样品中共检测到13个代谢转化成分。通过给予大鼠灌胃菟丝子提取物联合已烯雌酚药液，进行“谱-效”相关性研究，其相关的成分可能为菟丝子发挥雌激素拮抗作用的物质基础。（4）确定肉苁蓉拟雌激素样作用的活性部位，建立10个不同产地肉苁蓉活性部位的指纹图谱，鉴别出26个成分。通过对肉苁蓉“谱-效”相关性的分析，揭示肉苁蓉发挥拟雌激素作用的物质基础。（5）在肉苁蓉拟雌激素活性部位给药后的血清中共鉴定出13个化学成分；尿液中共鉴定出15个化学成分；粪便中共鉴定出14个化学成分。并采用大孔吸附树脂对肉苁蓉拟雌激素活性部位进行了分离纯化，对阐明肉苁蓉拟雌激素作用药效物质基础研究具有重要意义。（6）利用小鼠子宫增重实验和选用ER阳性MCF7细胞的增殖实验，确定肉苁蓉具有植物雌激素拮抗作用的有效部位及给药剂量。检测到肉苁蓉雌激素拮抗作用有效部位共有26个化学成分，并在大鼠体内共有12个入血成分；在尿液样品中共检测到15个代谢转化成分；在粪便样品中共检测到15个代谢转化成分。通过给予大鼠灌胃肉苁蓉提取物联合已烯雌酚药液，取得不同时间点的含药血清，进行“谱-效”相关性研究，其相关的成分可能为肉苁蓉发挥雌激素拮抗作用的物质基础，同时也为肉苁蓉植物雌激素拮抗作用机制的阐明及深层次的开发研究奠定了基础。本课题共培养硕士研究生6名，共发表论文10篇，其中被SCI、EI检索3篇，专利2项。