基于"谱效关系+一测多评"思路的黄芪药材质量评价研究

Astragali Radix is the common Qi-invigorating herb,it is attracting more attention for its special effect. However, it is difficult to formulate quality control standard of overall evaluating Astragali Radix for its Various sources, complicated component,etc. Based on the existing approach for quality control of Chinese herbs medicine, we put forward the research thinking of combination the spectrum-effect relationships with the multi-components quantities by one marker to improve overall quality control standard of Astragali Radix. Establish the chromatographic fingerprint of Astragali Radix by HPLC-DAD-ELSD. To enrich and purify the Astragalus saponins and flavonoids with macroporous adsorptive resins, then detect the HPLC fingerprint of saponins and flavonoids according to the fingerprint conditions of Astragali Radix. Method of grey relational analysis was used on the research of correlation between the chemical compositions information of Astragalus flavonoids with anti-hypoxia and anti-inflammatory effect, the correlation between Astragalus saponins with antioxidation. To clarify the effective components related to therapeutic effect in the utility part by spectrum-effect relationships. Furthermore monomers chemical structure will be identified by modern separation and spectroscopy testing technology,and screen their activity to verify the efficacy.We establish the method for overall quality control of Astragali Radix based on multi-assay depending on one determination.

黄芪作为常用补气类中药，以其独特的疗效越来越受到关注，但由于它来源多样、成分复杂等因素，难以制定出全面评价药材质量的控制标准。本课题在现有的中药材质量控制方法基础上，将"谱效关系+一测多评"的思路运用到黄芪药材质量控制标准全面提升的研究中，首先采用HPLC-DAD-ELSD联用技术对10批次以上不同产地黄芪药材建立指纹图谱；其次，通过大孔吸附树脂等柱色谱技术分别对黄芪皂苷与黄酮类成分进行富集，并按照黄芪药材指纹图谱条件分别建立皂苷和黄酮类成分HPLC指纹图谱，应用灰色关联分析法研究黄芪黄酮类成分与抗炎、耐缺氧药效的谱效关系，皂苷类成分与抗氧化药效的谱效关系，通过谱效关系阐明有效部位中与疗效有相关性的化学成分；继而通过现代分离分析技术及波谱学测试技术确定有效成分的结构并对其活性筛选，验证其药效；最后，应用"一测多评"法, 以一个内标对多个药效指标加以控制，达到全面控制黄芪药材质量标准的目的。

摘要：黄芪为常用补气类中药，由于它来源多样、成分复杂等因素，难以制定出全面评价药材质量的控制标准。本课题在现有的中药材质量控制方法基础上，采用谱效关系结合一测多评法全面评价黄芪药材质量。首先采用UPLC‐TOF/MS技术对宁夏、山西、内蒙、甘肃、河北、新疆等地21批黄芪样品建立指纹图谱,标定了近20个共有峰。通过高分辨质谱结合课题组分离并鉴定的黄酮及皂苷类化合物确证了共有峰的化学成分。进而采用大孔吸附树脂等柱色谱得到黄芪皂苷及黄酮类富集物，通过文献检索建立黄芪属54种皂苷类成分及106种黄酮类成分质谱数据库，利用面积归一化法，测得黄芪皂苷类及黄酮类富集物纯度大于70%。灰关联结果表明，黄芪皂苷Ⅲ、黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪甲苷与耐缺氧功效关联度较大；刺芒柄花苷、毛蕊异黄酮苷与抗炎作用的关联度较大。进一步将分离并鉴定的黄芪黄酮及皂苷类特征性成分进行抗炎、耐缺氧和抗氧化药效学研究。结果表明，毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅱ、毛蕊异黄酮、黄芪皂苷Ⅰ具有较强的抗炎作用。毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮葡萄糖苷在DPPH自由基的清除和总还原能力测定两种体外抗氧化模型下呈现了较好的抗氧化活性，黄芪皂苷Ⅰ具有较强的耐缺氧活性。其中毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花苷的抗炎作用机制与激活MAPK和NF-KB信号通路相关。最终通过对单体化合物的药效学验证，筛选出六种与疗效相关的有效成分，采用QAMS法，以黄芪皂苷Ⅰ为内标物，进行其他5个有效成分相对校正因子的计算，并计算含量，与外标法所测值无显著性差异(RSD＜5%)。实现了黄芪药材6个有效成分的同步测定。综合21个产地黄芪药材发挥疗效的共有化学成分含量，建议：按本研究提供的样品溶液制备方法，黄芪药材中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量不得少于0.032%；芒柄花苷的含量不得少于0.019%；毛蕊异黄酮的含量不得少于 0.010%；黄芪甲苷的含量不得少于0.019%；黄芪皂苷II的含量不得少于0.048%；黄芪甲苷I的含量不得少于0.230%。