质子泵抑制剂抑制空泡型质子泵表达影响PI3K/AKT/mTOR/HIF-1α信号通路而逆转胃癌化疗多药耐药的机制研究

胃癌化学治疗（简称化疗）多药耐药问题日益严重，如何逆转耐药值得深入研究。空泡型质子泵可调节胞内外pH值而与肿瘤耐药相关，药物转运蛋白如P-糖蛋白（P-gp），多药耐药蛋白1（MRP1）可作为药物转运子泵出化疗药物，与多药耐药密切相关。我们前期研究发现质子泵抑制剂（PPIs）泮托拉唑可抑制胃癌细胞株空泡型质子泵蛋白表达，改变胞内外pH值，也可提高胞内阿霉素的药物浓度，而阿霉素是P-gp和MRP1的共同底物，而泮托拉唑可抑制P-gp及MRP1的表达，但具体机制尚未阐明，故本研究拟通过体外试验证实PPIs是否通过抑制胃癌细胞株空泡型质子泵表达改变胞内外pH值，进而影响PI3K/AKT/mTOR信号通路，并抑制缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达，进而抑制P-gp和MRP1的表达而提高胞内化疗药物药物浓度，从而达到逆转胃癌化疗多药耐药的效果。体内试验予以进一步验证PPIs是否能逆转胃癌多药耐药。

目的：探究 PPIs抑制空泡型质子泵逆转胃癌化疗多药耐药与PI3K/Akt/mTOR/HIF-1α信号通路的关系。.f利用泮托拉唑或埃索美拉唑分别预处理胃癌细胞株（ SGC7901）及其耐药株（SGC7901/MDR），采用免疫印迹和免疫荧光法分别检测胞内空泡型质子泵（V-ATP）, PI3K, Akt, mTOR, HIF-1α，P-gp，MRP1的蛋白表达及胞内蛋白定位，比较预处理前后各种蛋白表达的差异..结果：PPIs可呈浓度依耐性的抑制 SGC7901/MDR细胞株胞内 V-ATP，PI3K，Akt， mTOR，HIF-1α，P-gp和 MRP1蛋白表达（P<0.05），对 SGC7901敏感株细胞株胞内 V-ATP， PI3K，Akt，mTOR，HIF-1α，P-gp和 MRP1蛋白表达无显著影响（P>0.05）；V-ATP si-RNA可抑制 SGC7901/MDR细胞胞内 V-ATP的表达（P<0.05），进而抑制 PI3K，Akt，mTOR， HIF-1α信号通路蛋白及耐药蛋白 P-gp的表达（P<0.05）；雷帕霉素可成浓度依赖性的抑制mTOR的表达，进而可抑制 SGC7901/MDR细胞内 HIF-1α及 P-gp的表达（P<0.05）。荷瘤小鼠体重增长速率均低于正常组裸小鼠长，而对照组体重增长明显低于治疗组（P<0.05），并且有下降趋势。治疗组之间体重变化无明显统计学差异（P>0.05）。荷瘤小鼠的对照组和泮托拉唑组肿瘤体积明显大于阿霉素组和泮托拉唑+阿霉素组（P<0.05），随着时间改变，肿瘤体积改变上升趋势明显，泮托拉唑+阿霉素联合治疗组肿瘤体积最小。经HE染色观察，各组瘤体组织结构均表现紊乱，泮托拉唑组可见炎性细胞及少量坏死，阿霉素组和泮托拉唑与阿霉素联合治疗组均可见片状坏死组织。TUNEL染色发现泮托拉唑+阿霉素联合治疗组凋亡指数较阿霉素组和对照组明显升高（P<0.05）。7）蛋白印记检测发现泮托拉唑组和泮托拉唑+阿霉素组与对照组和阿霉素组相比，PI3K，mTOR和HIF-1α，P-gp 的蛋白表达均下降，而Akt和V-ATPase表达改变无统计学差异..结论：PPIs可抑制空泡型质子泵表达进而抑制P-gp和MRP1的表达逆转胃癌化疗多药耐药，其机制与抑制 PI3K/Akt/mTOR/ HIF-1α信号通路密切相关。