从RANKL诱导前体破骨细胞分化探讨补肾活血法抗强直性脊柱炎骨破坏分子机制

骨破坏是强直性脊柱炎（AS）致残核心环节，缺乏针对性药物，寻求延缓或阻断骨破坏药物成为国际AS治疗学新靶标。破骨细胞（OC）是介导AS骨破坏的终极效应细胞，阻断前体OC分化成熟及封闭OC促分化因子是阻断骨破坏的关键。我们在前期完成国家十一五支撑计划及已结题国家自然科学基金基础上，提出"中医补肾活血法具有抗AS骨破坏作用"假说。拟以体外培养AS患者滑膜单核巨噬细胞为研究对象，观察细胞核因子κB受体活化因子配基（RANKL）诱导单核巨噬细胞向OC分化中细胞增殖、分化、凋亡状况，RANKL/RANK通路逐级信号分子mRNA转录、蛋白磷酸化、信号转位，基质金属蛋白酶3（MMP3）分泌及介导骨破坏组织形态学变化；同期观察补肾活血法对RANKL诱导的AS单核巨噬细胞增殖、分化、凋亡，RANKL/RANK信号转导通路及骨基质降解的影响。阐释补肾活血法抗AS骨破坏分子机制，为中医痹病治法学开辟一条新思路。

骨破坏是AS致残的核心环节，缺乏针对性药物，寻求延缓或阻断骨破坏的药物成为国际AS治疗学的新靶标。前期临床研究证实，补肾活血法治疗AS临床疗效满意，尤其在干预AS骨破坏方面可能发挥重要作用。本研究以来源于AS患者的滑膜单核巨噬细胞为研究对象，以RANKL/RANK信号通路为研究切入点，研究活动期AS患者血清RANKL、OPG表达情况及其滑膜组织中RANKL/RANK信号转导通路活化情况，从蛋白及mRNA水平研究RANKL/RANK信号通路中信号分子RANK、TRAF6、NF-κB、JNK、ERK、p38、NFATc1和骨吸收蛋白CATK、MMP3的表达及磷酸化情况；同期研究补肾活血法干预0,4,6个月对其影响作用。结果表明，AS患者血清RANKL、OPG高度表达，滑膜单核-巨噬细胞中RANKL/RANK信号通路高度活化，破骨细胞标志蛋白TRAP及参与骨吸收的蛋白CATK、MMP3的表达亦较正常明显升高。中药干预后血清RANKL、OPG表达明显受抑制，并且可以通过阻断RANK或胞内系列信号转导通路蛋白分子（TRAF6、NF-κB、JNK、ERK、p38、NFATc1）的表达，下调破骨细胞标志蛋白分子（TRAP）、参与骨吸收的CATK、MMP3蛋白表达，阻断RANKL/RANK信号通路的激活，抑制单核-巨噬细胞向破骨细胞的定向分化。研究证实，RANKL/RANK信号通路是AS骨破坏一条重要的信号通路，而补肾活血法可以通过封闭其活化，抑制了单核-巨噬细胞向破骨细胞的定向分化，从而发挥抗骨破坏的作用。