再生障碍性贫血中阻断CX3CL1/CX3CR1抑制T细胞向骨髓募集的动物实验研究

Aplastic anemia (AA) is an autoimmune disease targeted hematopoietic tissue. T-cell-mediated destruction and apoptosis of hematopoietic stem and progenitor cells is considered the root cause for bone marrow failure. Our previous studies in vitro have found that in AA patients，the expression of CX3CR1 was significantly increased on the T cells, and its corresponding ligand-CX3CL1 was also increased in bone marrow plasma, with effective treatment, the high expression of CX3CR1 was significantly decreased, as well as, chemotaxis and adhesion of T cells can be effectively inhibited by blocking interaction of CX3CL1 and CX3CR1. Thus, we have concluded that CX3CL1/CX3CR1-mediated T cells recruitment into bone marrow is closely related with development of AA. Based on above findings, we have planned to take the immune mediated mouse model of AA as research objects for deepening the previous works and observe the influence of the T cells migration into bone marrow and hematopoietic recovery by blocking the interaction of CX3CL1 and CX3CR in vivo. Expecting results may be a potential target for drug therapy of AA and then provide new ideas and clues for treatment of AA.

再生障碍性贫血（简称再障）是一种以造血组织为靶细胞的自身免疫性疾病，T细胞在骨髓中介导的造血干/组细胞的破坏和凋亡是导致骨髓造血功能衰竭的根本原因。我们前期的体外研究发现，再障患者T细胞表面CX3CR1的表达明显升高，其相应的配体CX3CL1在骨髓血浆中亦明显升高，随着有效的治疗，CX3CR1的表达明显下降。体外阻断CX3CL1与CX3CR1的相互作用可有效地阻断再障患者T细胞的趋化与粘附作用。推测CX3CL1与CX3CR1介导T细胞迁移至骨髓，与再障的发生、发展密切相关。基于上述的研究成果，本项目将以免疫介导的再障小鼠模型为研究对象，深化前期研究工作，通过体内阻断CX3CL1/CX3CR1轴，观察对于T细胞向骨髓迁移及造血功能恢复的影响。预期的研究结果可能成为再障潜在的药物治疗靶点，从而为再障的治疗提供新的思路和线索。

获得性再生障碍性贫血是一种骨髓衰竭性疾病。T细胞介导的造血干/祖细胞的破坏和凋亡被认为是导致造血功能衰竭的根本原因。我们前期研究发现，再障患者T细胞表面CX3CR1表达明显升高，其相应的配体CX3CL1在骨髓中亦明显升高，且随着有效的治疗，CX3CR1表达下降。体外应用anti-CX3CL1抗体可有效阻断患者T细胞的迁移与粘附作用。因而我们认为再障T细胞迁移到骨髓发挥免疫效应与其表面趋化因子受体-CX3CR1的表达密切相关。在这个研究基础上，本项目拟以免疫介导的再障小鼠模型为研究对象，进一步分析CX3CL1/CX3CR1相互作用与骨髓造血功能衰竭之间的联系。然而，进一步查阅文献，并通过流式细胞术证实，CX3CR1在小鼠外周血细胞的表达与人类不同，小鼠CX3CR1在其淋巴细胞表面不表达。在课题进入死胡同阶段，山东大学齐鲁医院彭军教授团队通过微阵列分析3例再障患者骨髓T淋巴细胞中MicroRNAs（miRNAs）的表达，发现再障患者T细胞中有31种miRNAs的表达与健康人明显不同，呈现 16种miRNAs 过表达、15种miRNAs低表达。其中升高表达的miR34a与抑癌基因p53信号途径变化紧密相关，编码miR-34a的基因是p53直接作用的靶标，与p53抑癌基因相似，miR34a能够抑制细胞增殖，促进凋亡。随后该团队进一步通过RT-PCR技术证实再障患者单个核细胞中miR34a明显高于健康对照，且与疾病的严重程度呈相关性。考虑研究方向相似，我团队与彭军教授团队合作进一步发现甘油二酯激活酶ζ（DGKζ）作为miR34a作用的下游靶基因位点，通过与失调的miR34a相互作用，参与了T细胞的活化。通过miR34a-/-小鼠介导的骨髓衰竭模型检测miR34a和其靶基因DGKζ在再障中的作用，发现miR34a-/-小鼠的淋巴结T细胞在体外激活后，与野生型C57BL6对照小鼠比较，其活化及增殖减弱，伴随DGKζ的表达轻度下调及细胞外信号调节激酶磷酸化作用的减弱。注射5×106 miR34a-/-小鼠的淋巴结T细胞/（或）野生型C57BL6小鼠淋巴结T细胞到亚致死性辐射杂交小鼠CB6F1，注射miR34a-/- T细胞组的CB6F1小鼠Lin-Scal+CD117+ 细胞增加，CD8+T细胞更少扩增。综上所述，miR34a与DGKζ在再障患者T细胞免疫方面扮演了一个关键的角色。