玉米游离小孢子培养技术的研究

本研究建立了一套高效玉米游离小孢子培养程序，提供了一个再生能力较强的玉米单位体性细胞培养体系。以匀浆机提取小孢子后再以15%蔗糖作分离液进行离心分离，可以获得成活率为70-80%的小孢子群体，接种效率比花药培养提高20—30倍。在培养基中增加丝氨酸和谷氨酰胺，将单核后期至二核早期的小孢子在7℃下处理14天，以5—6万/ml的密度接种以及通过遗传学改良都可以大幅度提高胚胎化能力。在理想条件下每100枝花药的小孢子可产生胚状体200-300块，比国内玉米花药培养报道提高3-5倍。细胞学和同工酶研究证明小孢子胚胎化能力是由配子体基因型所决定的。胚状体早期转移及在分化培养基中添加多效唑能明显提高胚状体的分化率和再生株质量。