ADAM-17激活EGFR信号通路介导大肠癌化疗耐药及肠胃清对其作用的研究

To investigate the differently expression of ADAM-17 effect on cell apoptosis.human colon cancer resistant cell HCT116/L-OHP to oxaliplatin(L-OHP).Construct targeted ADAM-17 gene Small interfering RNA (siRNA) plasmid, transfection HCT116/L-OHP resistant cells using molecular cloning methods, the detection of intracellular expression of ADAM-17 , further verification the possible mechanism of drug-resistant colon cancer cell apoptosis pathway . Observe the effect of compound Changweiqing（CWQ） containing serum of ADAM-17/EGFR apoptosis pathway , to elucidate the molecular mechanisms of resistance of traditional Chinese medicine CWQ reversal of human colon cancer oxaliplatin explore ADAM-17 and cancer drug resistance mechanisms , for the mechanism provides a new research ideas and experimental evidence to clarify the clinical Chinese medicine to increase tumor cell sensitivity to chemotherapy.

本课题旨在探讨差异表达的ADAM-17对人结肠癌奥沙利铂（L-OHP）耐药细胞HCT116/L-OHP凋亡作用的影响。通过分子克隆的方法构建靶向ADAM-17基因的siRNA质粒, 转染HCT116/L-OHP耐药细胞，检测细胞内ADAM-17的表达，进一步验证ADAM-17在结肠癌耐药细胞凋亡通路中的可能作用机制。观察中药复方肠胃清（CWQ）含药血清对ADAM-17/EGFR凋亡通路的影响，阐明中药复方肠胃清逆转人结肠癌奥沙利铂耐药的分子机制，探索ADAM-17与肿瘤耐药的相关机制，为指导临床应用中医药增加肿瘤细胞化疗敏感性的作用机制提供了新的研究思路和实验依据。

多药耐药（MDR）是影响结直肠癌临床化疗疗效的重要因素之一，但其机制尚不清楚。前期研究发现ADAM-17在结肠癌HCT116/L-OHP耐药细胞株中呈高表达，与HCT116敏感细胞株比较，差异具有统计学意义（***P<0.001）。本实验通过分子克隆的方法构建靶向ADAM-17基因的siRNA质粒, 转染HCT116/L-OHP耐药细胞4h，用L-OHP治疗48h后，realtime-PCR验证成功沉默ADAM-17基因，Western blot证实ADAM-17基因的上调激活EGFR信号通路是大肠癌发生多药耐药的重要机制。发现健脾解毒中药复方肠胃清具有抑制ADAM-17蛋白编码，阻断EGFR信号通路激活的调节作用；证实肠胃清通过ADAM-17/EGFR/BCL-2凋亡通路增加大肠癌化疗敏感性，逆转耐药的抗肿瘤作用。为指导临床应用中医药增加肿瘤细胞化疗敏感性的作用机制提供了新的研究思路和实验依据。此外，我们发现肠胃清联合奥沙利铂能显著抑制HCT116/L -OHP 耐药细胞的侵袭能力，其机制与ADAM-17蛋白下调有关，该成果发表在《中国临床药理学杂志》上（2016,32（23）：2166-2169）。我们还通过临床病理标本对比发现长链非编码RNA Loc554202对大肠癌侵袭能力起负反馈的调节作用，可以作为大肠癌预后的生物学标志，该研究成果发表在European Review for Medical and Pharmacological Sciences（2016; 20: 4243-4247，IF：1.575）杂志。标注该课题的文章5篇，其中SCI收录1篇。培养硕士研究生2名。