滤泡辅助性T细胞(Tfh)通过c-maf调节B10参与移植耐受的机制研究

B细胞通常被认为具有促进排斥反应的作用，但是清除受者体内B细胞并未得到预期效果甚至出现加快排斥。在自身免疫性疾病、感染、肿瘤等过程中存在一群具有分泌IL-10而发挥免疫调节功能的B细胞（称之为B10）。然而B10在移植免疫中的分化、增殖及其在诱导移植物耐受中的作用还未见报道。我们前期研究发现移植物耐受的小鼠受者脾脏内B10明显增多。新近研究表明，专职辅助B细胞的滤泡辅助性T细胞(Tfh)表达的ICOS和分泌的IL-21上调c-maf促进IL-10表达，Tfh缺陷的小鼠体内B细胞生成IL-10受损。由此我们推测：Tfh通过上调c-maf促进B10分化参与诱导移植物耐受。为验证假设，本课题拟阻断Tfh相关分子信号，特异性沉默或转染B细胞c-maf基因，通过体内外诱导B10分化证实Tfh通过c-maf调控B10分泌IL-10参与诱导移植物耐受。期望为临床诱导移植物耐受提供完全新的思路和靶点。

调节性B细胞（Breg）在自身免疫性疾病、感染、肿瘤等进程中发挥重要功能，然而其在移植免疫中的作用还不明确。在本项目的支持下，我们发现：在小鼠心脏移植模型中，移植术后受者体内B10表达明显增加，给予免疫抑制剂环孢素及雷帕霉素后B10表达进一步增多，移植物存活时间延长，移植术前清除B细胞使免疫抑制剂延长移植物存活时间的作用明显减弱，而过继输注B10能促进移植物耐受的诱导。由于滤泡辅助性T细胞（Tfh）流式分选效率低，原计划进行的Tfh体外实验未能如期进行，但是通过检测受者体内Tfh的变化发现，移植物内Tfh术后表达明显增加，Tfh的数量与排斥反应程度负相关，我们可以得出结论，Tfh参与移植排斥反应，这为移植排斥的干预提出了可行的治疗方案。Tfh高表达ICOS，CD40L及IL-21，体外实验发现，B10的生成依赖ICOS及CD40L，IL-21促进B10的分化及其分泌IL-10，且这种作用是通过上调c-maf发挥的。然而受者体内给予IL-21并不能延长移植物的存活时间，反而促进移植物排斥，这与其同时促进抗体生成有关。本项目表明：Tfh参与移植排斥反应，其表达的ICOS，CD40L及IL-21促进B10生成，这与c-maf活性增强有关；激活B10生成促进移植物存活，有利于移植耐受的诱导。这一研究为排斥反应的干预有指导意义。