荷叶生物碱降脂活性成分及其构效关系的研究

荷叶是我国独具特色的"药食"两用植物，资源丰富，现代研究表明，荷叶具有很好的降脂减肥功效，其最重要的降脂活性成分是生物碱类。目前国内外在荷叶生物碱的提取工艺和定量测定方面已取得了较好的研究成果，但对于具体的降脂活性单体及其量效、构效关系等方面尚未展开深入研究。本项目拟应用现代先进的天然产物有效成分分离分析技术，建立系统的荷叶生物总碱的提取制备、生物碱单体的分析鉴别和分离纯化方法，以期制备获得多个生物碱单体。通过理化性质的测定和四大光谱的检测，进行各生物碱单体的结构鉴定。采用医学标准的高脂血症动物降脂试验，明确具有降脂活性的生物碱单体，并深入研究其量效和构效关系。本项目的研究成果，可为荷叶天然功能性食品和降脂保健药物的研究开发提供理论基础和实践依据，对于改善目前高脂血症的调脂治疗效果不理想的状况，具有十分重要的理论和现实意义。

项目建立了超声波辅助提取荷叶生物碱的系统方法和条件，确定了高速逆流色谱和制备高效液相色谱法分离纯化荷叶生物碱单体的溶剂系统和条件，分离纯化获得了6种荷叶生物碱单体，纯度均在90%以上。通过薄层色谱分析鉴别，采用四大光谱（紫外光谱、红外光谱、核磁共振谱和质谱）检测，分析鉴定这6种生物碱单体分别为原荷叶碱、亚美罂粟碱、巴婆碱、O-去甲基荷叶碱、N-去甲基荷叶碱和荷叶碱。通过考察荷叶总生物碱对高脂血症大鼠体质量、体脂以及血清脂质相关指标的影响，得出荷叶总生物碱具有控制体重，预防肥胖，调节脂代谢紊乱的功效。通过对硝基苯酚法检测荷叶总生物碱及四种荷叶生物碱单体对胰脂酶活性的影响，得出荷叶生物碱单体对胰脂酶活性的抑制效果是荷叶碱和N-去甲基荷叶碱相仿，O-去甲基荷叶碱和巴婆碱的效果相仿，并且O-去甲基荷叶碱的抑制效果略好于巴婆碱，四种单体的抑制效果都呈现出剂量效应。将提取得到的荷叶总生物碱作用于3T3-L1前脂肪细胞，采用MTT法和流式细胞术测定其对细胞增殖、周期、凋亡以及分化的作用，得出荷叶总生物碱能显著抑制细胞增殖、凋亡和分化，将细胞阻滞于G0/G1期，并呈剂量依赖效应。将分离纯化得到的6种荷叶生物碱单体分别作用于3T3-L1前脂肪细胞，采用MTT和流式细胞术测定其对3T3-L1前脂肪细胞的增殖、周期、凋亡以及分化的作用，并进一步分析了构效关系。结果表明，6种生物碱单体对细胞增殖以及凋亡的抑制效果为 N-去甲基荷叶碱＞巴婆碱＞O-去甲基荷叶碱＞荷叶碱，而原荷叶碱和亚美罂粟碱几乎没有抑制效果。对细胞周期的影响，巴婆碱将细胞阻滞于G2/M期，O-去甲基荷叶碱将细胞阻滞于G0/G1期，N-去甲基荷叶碱与荷叶碱均将细胞阻滞于S期。比较荷叶碱与N-去甲基荷叶碱对分化的抑制效果可以发现，荷叶碱对分化的抑制效果优于N-去甲基荷叶碱。同时，荷叶碱在较低浓度时就能起到很好的抑制分化的效果，而荷叶碱对增殖的抑制作用以及凋亡的促进作用均较弱，说明前脂肪细胞的分化作用与增殖以及凋亡作用之间可能不存在联系。.综上所述，本项目组在前期研究的基础上，进一步分离鉴定获得了6个生物碱单体，建立了荷叶生物碱单体提取、分离纯化和结构鉴定的系统方法和工艺条件，创新性地深入开展了荷叶生物碱单体的降脂活性方面的研究，并分析其量效和构效关系，可为荷叶天然功能性食品和降脂保健药物的开发提供理论依据和实践基础。