HBP21与HSP90相互作用在增生性玻璃体视网膜病变中的作用及机制研究

增生性玻璃体视网膜病变（PVR）是导致患眼失明的重要原因。PVR的基本病理过程是视网膜色素上皮(RPE)细胞为主的细胞增生和迁移，文献报道热休克蛋白90（HSP90）能与PVR相关的多个重要因子相互作用，参与细胞的增殖和迁移等，我们前期实验和文献报道证实了抑制HSP90可以抑制RPE细胞的增殖。为了研究HSP90在RPE细胞中的作用机制，我们克隆了一个新基因HBP21,可以特异性地与HSP90相互作用，并且在PVR增生膜中高表达，这提示HBP21与HSP90的相互作用可能参与了PVR的病理过程。本研究拟在前期工作基础上，通过细胞水平和动物模型研究，观察HBP21与HSP90相互作用对RPE细胞增殖、黏附、迁移以及对PVR兔模型的影响和机制，从而为探索PVR的发病机制及找到新的治疗靶点奠定基础。

增生性玻璃体视网膜病变（PVR）是导致患眼失明的重要原因。PVR的基本病理过程是视网膜色素上皮(RPE)细胞为主的细胞增生和迁移，文献报道热休克蛋白90（HSP90）能与PVR相关的多个重要因子相互作用，参与细胞的增殖和迁移等，我们前期实验和文献报道证实了抑制HSP90可以抑制RPE细胞的增殖。为了研究HSP90在RPE细胞中的作用机制，我们克隆了一个新基因HBP21,可以特异性地与HSP90相互作用，并且在PVR增生膜中高表达，这提示HBP21与HSP90的相互作用可能参与了PVR的病理过程。本研究拟在前期工作基础上，通过细胞水平和动物模型研究，观察HBP21与HSP90相互作用对RPE细胞增殖、黏附、迁移以及对PVR兔模型的影响和机制，从而为探索PVR的发病机制及找到新的治疗靶点奠定基础。.在验证HBP21和HSP90相互作用的实验中，我们增加了HBP21和HSP90的免疫共沉淀实验，以进一步证明两者在RPE细胞中相互作用。但是因为HBP21是我们首先发现的新基因，没有商品化的抗体，在公司订制的抗体效价低，所以改用了构建标签蛋白FLAG的方法进行免疫共沉淀。初步的单向免疫共沉淀提示HBP21和HSP90在RPE细胞内相互结合，反向的免疫共沉淀结果正在进行中。在构建HBP21稳定低表达的RPE细胞系后，RPE的增殖较对照组显著下降以致停止分裂，无法获得足够的细胞量进行下一步提取RNA，蛋白质等实验，说明HBP21很可能是RPE细胞增殖的重要因子。因此，我们使用了可诱导的RNA干扰来代替原有的方案以进一步研究。.在本基金的资助下，课题组还进行了其它一系列PVR相关的基础和临床研究。我们前期试验的结果表明HSP90抑制剂17-AAG对RPE细胞增殖抑制作用可能跟氧化应激有关，所以课题组增加了17-AAG抑制RPE细胞增殖与氧化应激的关系研究。结果证实17-AAG抑制RPE细胞增殖的同时，RPE细胞氧化应激水平升高，相关抗氧化蛋白下调，而加入还原剂NAC可以缓解细胞凋亡，说明氧化应激可能参与17-AAG的作用机制。骨桥蛋白(OPN)是一种增生相关蛋白，在多种增生性疾病中呈高表达。我们的研究结果表明PVR患眼玻璃体液和增生膜中OPN水平明显增高，尤其是在发病初期，玻璃体液中OPN浓度随病程发展有增高趋势，说明OPN在PVR的早期病理过程中可能起到一定的作用。