牙周组织细胞中转运蛋白对常用抗生素蓄积的作用

牙龈卟啉单胞菌已被证实可侵入牙龈上皮细胞，逃避机体免疫及刮治治疗。因此，抗生素必须进入胞内杀灭细菌，才可提高疗效。抗生素进入细胞取决于转运蛋白，但牙周细胞具备何种转运蛋白，可转运哪种抗生素入胞？如何转运？如何调控？这些仍有待研究。本课题即以此为目标，以牙龈上皮细胞，牙周膜成纤维细胞和成骨细胞为研究对象，通过HPLC检测胞内抗生素（甲硝唑，替硝唑，米诺环素，四环素，诺氟沙星，头孢噻肟钠）的时间浓度曲线、RT-PCR、蛋白印迹及免疫染色技术分析蛋白基因及表达，来了解不同抗生素的转运过程，认识组织细胞上转运蛋白的种类和起主要作用的转运蛋白，之后针对OCTNs转运米诺环素的过程，考察H+，Ca2+，Na+，K+和葡萄糖、雌激素的作用，探索其转运及调控机理，认识细胞外环境对该转运蛋白及转运过程的影响。本研究为阐明口腔局部抗生素的分布、代谢提供了理论支持，为临床合理用药及开发新药提供新思路。

牙周病，种植体周围炎是造成牙齿及种植体脱落的最主要的原因，彻底去除相关致病菌可有效控制疾病，减少牙齿脱落。牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis, P.g）是这两种疾病的重要致病菌，可侵入牙周组织细胞内逃避被免疫细胞吞噬及被机械刮治去除，造成炎症反复发作。因此，需要抗生素进入组织细胞内杀灭细菌，提高疗效。本课题就大鼠牙龈上皮细胞和牙槽骨成骨细胞对抗生素的转运进行初步探讨，发现米诺环素最易被上述两种细胞转运并可在细胞内达到较高药物浓度，其次是四环素，诺氟沙星，甲硝唑，替硝唑，和头胞噻肟钠，未在细胞内检测到罗红霉素和盐酸林可霉素。同时，对细胞上的转运蛋白的mRNA进行测定时，发现成骨细胞可表达OCT1、OAT2、OAT3、OATP2、OCTN1、OCTN2和OCTN3，牙龈上皮细胞可表达OCT1，OCT2、OAT1、OAT2、OAT3，OATP1，OCTN1、OCTN2和OCTN3。在对成骨细胞转运米诺环素的研究中发现，主要是 OCTN1，OCTN2参与了对米诺环素的转运，低温及L-卡尼丁均可抑制米诺环素的转运，说明成骨细胞对米诺环素的转运主要是通过有机阳离子/肉毒碱转运体OCTN进行的主动转运过程。希望对提高临床局部用药的针对性和科学性及局部药物的开发上有所帮助。