从25只成年虎纹捕鸟蛛中得到0.6g蜘蛛毒腺,分离纯化获得mRNA,合成cDNA,构建了中国珍稀毒蛛种虎纹捕鸟蛛毒cDNA文库,其滴度为3.2×10(7)pfu/ml。根据虎纹毒-I(HWTX-I)氨基酸序列分析结果,设计合成N端、C端和中间段三套简并引物,经RT-PCR方法,对蜘蛛毒腺cDNA多次扩增,特异性片段与PCR产物特异载体PUC-T连接转化后,阳性克隆经DNA序列测定,与预期编码HWTX-I基因N端32个氨基酸的序列是一致的,Genedank检索结果发现HWTX-IcDNA N端编码序列是一新的DNA序列。全化学合成HWTX-I基因,在大肠肝菌以融合蛋白形式表达,纯化后的重组HWTX-I序列与设计一致,电生理方法证实还原得到的重组多肽活性与天然HWTX-I相同。全化学合成HWTX-II基因表达结果,提示HWTX-II具有不同于HWTX-I的生理活性。
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数据更新时间:2023-05-31
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