miR-376b 介导的细胞自噬在羟基酪醇逆转肝癌耐药中的作用及其机制研究

The emergence of chemoresistance within tumour cells is one of the main reasons for treatment failure of HCC. Our previous studies have demonstrated that hydroxytyrosol could effectively suppress the growth of hepatocellular carcinoma in vitro and in orthotopic hepatocellular carcinoma in nude mice. Further studies confirmed that hydroxytyrosol could overcome the multidrug resistance in multidrug-resistant human hepatocellular carcinoma cell lines, however, its exact mechanism is not clear. Recently, more and more studies have focused on the role of microRNAs in the regulation of MDR. As a result, We will attempt to study the effect of hydroxytyrosol on overcoming MDR in hepatocellular carcinoma from this point of view. In this study, we used miRNA chips to screen differentially expressed miRNA in HCC cell lines resistant to doxorubicin when treated with hydroxytyrosol，and then found the crucial miRNA-miR-376b and its target gene- Beclin1 using bioinformatics method. We will then explore the effect of miR-376b on overcoming MDR of HCC and its possible mechanisms. Our study is designed to test the interactions and mechanisms of miR-376b in the process of overcoming MDR in hepatocellular carcinoma by hydroxytyrosol, provide a new therapeutic target for HCC and adequate evidence for the anti-cancer effects of hydroxytyrosol.

化疗耐药是肝癌治疗失败的主要原因之一，我们前期研究证实，羟基酪醇可有效抑制肝癌细胞的增殖及裸鼠原位肝癌的生长，进一步研究证实羟基酪醇可逆转肝癌耐药细胞的耐药性，但其作用机制尚未阐明。近年来，microRNAs 通过对基因表达的调控参与逆转化疗耐药的作用日益受到重视，本课题尝试从这一崭新角度研究羟基酪醇逆转肝癌耐药作用及其可能机制。本项目拟以肝癌阿霉素耐药细胞株为研究对象，采用 miRNA 芯片和生物信息学等手段筛选出羟基酪醇逆转肝癌耐药相关的关键性miRNA-miR-376b及其作用靶点Beclin1，通过基因克隆和RNA 干扰等技术干扰miR-376b表达，在细胞和动物模型中探讨miR-376b 在羟基酪醇逆转肝癌耐药中的作用及其调控机制，为针对肝癌耐药的治疗提供新的靶点，并开辟羟基酪醇抗肿瘤作用机制研究的新思路，为其进一步开发利用提供更充分的科学依据。

原发性肝癌是全球最常见的恶性肿瘤之一，多年来其治疗仍然以传统的手术切除为主，化疗作为治疗肿瘤的重要手段之一，在许多恶性肿瘤的治疗方面取得了很好的疗效。但是，肝癌细胞对化疗药物的耐药常常导致化疗失败，临床实验证实大多数化疗药物单药有效率不足20%，我们前期研究证实，羟基酪醇可逆转肝癌耐药细胞的耐药性，但其作用机制尚未阐明，基于上述问题，本课题组采用 miRNA 芯片和生物信息学等手段筛选出羟基酪醇逆转肝癌耐药相关的关键性miRNA-miR-376b，通过RNA干扰等技术干扰miR-376b表达，在细胞和动物模型中探讨miR-376b在羟基酪醇逆转肝癌耐药中的作用及其调控机制。本实验研究结果证实：（1）在不同肝癌耐药细胞系中，羟基酪醇均可引起细胞内miR-376b高表达；（2）过表达miR-376b耐药细胞中，细胞自噬减弱，细胞凋亡增强以及细胞周期阻滞，相反，沉默miR-376b耐药细胞自噬增强，细胞凋亡减弱，提示高表达miR-376b介导的细胞自噬参与可羟基酪醇逆转肝癌耐药；（3）裸鼠原位肝癌模型证实过表达miR-376可有效的抑制裸鼠原位肝癌肿瘤增长，抑制Ki-67和CD31表达以及促进肿瘤组织中细胞凋亡。本实验研究结果证实，miR-376b介导的细胞自噬为羟基酪醇逆转肝癌细胞耐药的作用机制之一，为羟基酪醇的抗肿瘤作用提供充分的理论依据，为肝癌的化疗提供新的作用靶点和干预手段。