对虾白斑综合症病毒（WSSV）不同毒力株的序列测定和毒力基因的分析

It's been 20 years since the white spot syndrome virus (WSSV) caused the first outbreak in 1993, but still less effective against the virus. In recent years, researchers have found that there are significant differences in the virulence between different strains of WSSV and the mortality rate and time of death caused by some strains showed a marked reduction compared to the initial strain, suggesting that the viral genome may be subject to mutation. However, this variation of the area or genes involved in pathogenicity or virulence has not been reported. The purpose of this project is to identify viral virulence genes by screening WSSV isolates of different virulence and sequencing their genome. In addition, we will develop a rapid diagnostic assay for detecting the level of virulence of WSSV strains in shrimp to determine the pathogenicity of the epidemic strain. Simultaneously, we will attempt to obtain a non-pathogenic attenuated strain or avirulent strain by continuous passage to act as an immunogen or a competitive blocker for protection against pathogenic WSSV infection.

对虾白斑综合症病毒（white spot syndrome virus，WSSV）自1993年爆发至今已有20年，但仍对其缺乏有效的控制措施。值得关注的是近年来发现不同的病毒株之间存在毒力的差异，有些毒株引起的虾死亡率和死亡时间与爆发初期相比已有明显的降低和延长，说明病毒基因组可能发生了变异，但究竟哪些区域或基因的变异与致病性或毒力相关至今没有报道，这正是本申请项目需要研究的主要内容。为此拟对毒力明显差异的WSSV分离株进行病毒全基因组测序，通过基因组比较分析找出相关的分子变异区域，并进行毒力基因的功能验证，揭示病毒变异与致病性的本质。此外，建立鉴别病毒株毒力高低的快速检测技术，有助于及时判断养殖过程中流行株的致病性。同时尝试通过连续传代来获得基本上无致病性的弱毒株或无毒株，希望利用它们作为免疫原或竞争性阻断剂来预防致病性的WSSV感染。

本课题完成了10株不同毒力的WSSV病毒基因组序列测定。其中高毒株WSSV-CN01，中毒株WSSV-CN02和低毒株WSSV-CN03。病毒株的基因组进行测序，注释和比较，发现低毒株比高毒株缺失了约20个基因，其中涉及6个膜蛋白基因和2个极早期基因。毒力差异显著的WSSV－CN01、CN02和CN03株能引起机体不同的免疫反应，CN01和CN02感染能诱导血细胞凋亡或死亡，因此引起螯虾循环血细胞显著减少。此外，我们从自然感染日本囊对虾中发现了一种新的病毒株，WSSV-CN04。全基因组测序结果表明，该病毒株基因组为281054 bp，编码157个蛋白，与弱毒株WSSV-CN03基因组共享97.5%的同源性。值得关注的是，在WSSV-CN04中由于主要囊膜蛋白VP24基因的大片段缺失，成熟的病毒粒子上已失去VP24蛋白。研究证明VP24还是一种几丁质结合蛋白，介导病毒经消化道感染宿主。通过WSSV-CN03和WSSV-CN04经口灌注实验表明，WSSV-CN04感染明显低于CN03，而且不易在消化道中滞留，更容易被排出，因此降低了病毒粒子穿过消化道壁进入体内的机会，从而体现出较弱的感染性。我们发现VP24几丁质结合域肽能显著降低CN-03在中肠的量，进一步证明了VP24在WSSV经消化道途径感染中的重要作用，这为防治WSSV病毒感染提供了新的思路和方法。