条件控制单核巨噬细胞miR-146水平对鼠内毒素休克模型转归的影响及机制研究

感染性休克治疗远未达到满意的疗效，死亡率仍高达30％－70％。30多个临床多中心大样本研究显示非特异性外源途径（细胞外）"抗炎"治疗的结果均令人沮丧。促使我们必须重新思考脓毒血症的分子机制并寻找新的高特异性治疗靶点。巨噬细胞作为固有免疫的第一道防线，对启动内毒素休克有关键作用。Toll样受体4是炎症信号向固有免疫细胞内传递以及诱发获得免疫的核心通路。MiR-146是目前发现的TLR4信号通路中最重要的小分子RNA反馈机制。本研究利用小分子RNA片段小，容易人工合成，可在细胞内直接发挥效用的特点，利用pSLIK小分子RNA条件表达平台，通过诱导剂Dox和内源性溶解酵酶M启动子条件控制巨噬细胞内miR-146水平，干预TLR4信号通路，观察对鼠内毒素休克模型转归的影响，并探讨其作用机制。

MiR-146是目前发现的TLR4信号通路中最重要的小分子RNA反馈机制。本研究利用pSLIK小分子RNA条件表达平台，通过诱导剂Dox和内源性溶解酵酶M启动子条件控制巨噬细胞内miR-146水平，以及利用人造miR146a类似物和抑制物干预TLR4信号通路，观察对单核巨噬细胞炎症反应，及鼠内毒素休克模型转归的影响，并探讨其作用机制。结果显示，LPS刺激人外周血单个核细胞后miR146a表达显著增加。利用入门重组构建miR146a重组质粒慢病毒包装。体外转染单核巨噬细胞后，Dox能剂量依耐性诱导miR146a表达。体外实验中加入Dox上调miR146a水平后，激活TLR受体诱导的促炎因子TNF-a，IL-1，IL-6的表达有不同程度降低，而抗炎因子IL-10，TGF-beta和INF-gamma的表达有不同程度增高。体外实验中加入Dox上调miR146a水平后，单核巨噬细胞TLR4激活后细胞内信号蛋白TRAF-1和IRAK-1水平下降更显著。体外实验中虽然miR-146a类似物对LPS打击后细胞死亡无明显影响，但miR-146a抑制物可促进大剂量LPS打击后诱发的THP-1细胞死亡。大剂量LPS打击下miR-146a抑制物促进THP-1细胞死亡的机制可能为pyronecrosis。虽然miR146a抑制物和类似物对致死剂量LPS打击后实验动物生存时间无显著影响，但miR-146a类似物增加非致死量LPS处理（2.5mg/kg) C57BL/6小鼠旷场实验活动距离，缩短游泳实验静止时间。