MiR-126靶向PIK3R2基因调控PI3K/AKT信号通路对卡波西肉瘤生物学行为的影响

Our prior research finding analysis revealed that the expression of miR-126 was deregulated in kaposi’s sarcoma and matched adjacent healthy tissues. It showed that miR-126 can inhibit cell proliferation and confirmed that PIK3R2 was a direct target gene of miR-126. PIK3R2 gene is the key starting genes of PI3K/AKT signal pathway. Thus, we hypothesize that miR-126 plays a crucial role in the development of kaposi’s sarcoma, and miR-126 may exert its functions through PI3K-AKT signaling pathway to regulate PIK3R2. In order to confirm the hypothesize, we will examine PIK3R2 and key gene in PI3K/AKT signal pathway by RT-PCR, Western blot and IHC, and determinate the association between its expression and clinicopathological parameters in large clinical samples; last we will investigate the effect of tumor angiogenesis, apoptosis related proteins and mechanism of action on miR-126 and PIK3R2 gene, and provide new clues to early diagnosis and gene therapy for renal cell carcinoma.

本课题前期研究发现miR-126在卡波西肉瘤肿瘤与瘤旁组织中存在明显差异表达，并在细胞水平证明miR-126抑制卡波西肉瘤细胞的增殖，也证实了PIK3R2基因是miR-126直接作用靶标。而PIK3R2基因是PI3K/AKT信号通路的关键起始基因，该通路是调控细胞增殖的重要信号通路之一，在此基础上我们提出假说：miR-126通过PIK3R2调控PI3K-AKT信号通路而抑制卡波西肉瘤的增殖。为了验证这一假说，本项目拟采用qRT-PCR、Western blot、免疫组化、CCK-8、细胞凋亡、裸鼠模型等技术方法分析PIK3R2及PI3K/AKT信号通路的关键基因在卡波西肉瘤的表达及其与患者病情的相关性、研究PIK3R2基因表达的表观调控机制，探讨miR-126及PIK3R2基因对肿瘤细胞生长、肿瘤血管形成、凋亡相关蛋白的影响及作用机制，为卡波西肉瘤的早期辅助诊断和基因治疗提供新的线索。

卡波西肉瘤(Kaposi'ssarcoma,KS)又叫多发性特发性出血性肉瘤。在我国，经典型卡波西肉瘤主要发生于新疆少数民族人群，其发病因素不明确，皮损往往为多灶性。卡波西肉瘤的治疗尚无标准化指南，常用治疗方法有放疗、化疗、物理治疗及药物治疗，但远期疗效欠佳，疾病易复发。对发病因素的研究有利于疾病的预防及治疗。本研究将长期居住新疆的经典型KS患者和非KS患者做病例对照研究，分析其发病因素。并对卡波西肉瘤起源进行探讨。microRNA-126（miR-126）参与多种肿瘤的生长调控，在卡波西肉瘤中表达上调，作用靶标为PI3K。PTEN/PI3K/AKT信号通路是调控细胞生长与凋亡的经典通路。该研究旨在探讨miR-126对该信号通路在体外调控作用，期待发现KS的靶向治疗分子；探讨PTEN/PI3K/AKT信号通路成员PTEN、P-PTEN、AKT、P-AKT、PDK在卡波西肉瘤中的表达，分析该通路在卡波西肉瘤生长中的作用。. 卡波西肉瘤影响因素的调查研究发现性别及食用馕的频率为卡波西肉瘤发病的负关联因素，洗澡频率及吸烟为其正关联因素。食用馕的频率、食用牛羊肉的频率及饮酒频率分别与民族在卡波西肉瘤的发病中有交互作用。本课题从细胞水平进行研究，且结合疾病的病程变化纵向分析其组织学特点，同时对既往相关研究做了系统评价分析，支持卡波西肉瘤梭形细胞的血管内皮细胞起源。在卡波西肉瘤病毒血清阳性率与性别因素的meta分析发现，在成年男性和成年女性在 KSHV 感染方面，男性相较于女性更容易感染。在儿童人群中，儿童男性和儿童女性在 KSHV 感染方面没有统计学差异。miR-126调控PTEN/P13K/AKT信号通路关键成员的表达，在体外SLK细胞中，miR-126负调控AKTl的表达，但对PTEN的表达无明显调控作用；在卡波西肉瘤组织中PTEN被活化，可能为KS潜在的治疗靶点。AKT2在体外SLK细胞、卡波西肉瘤组织及正常皮肤组织中均无表达；在体外SLK细胞中，miR-126负调控PDKl的表达；PDKl在卡波西肉瘤中的表达主要发生在疾病早期，理论上PDKl可以作为卡波西肉瘤治疗的潜在靶标。