穿孔素的粒酶B非依赖凋亡诱导活性及其机制的研究

穿孔素蛋白是抗肿瘤细胞免疫反应中重要的效应分子，但是对它的认识仅仅局限于在细胞膜表面聚合成孔上，而穿孔素在细胞毒作用中的具体功能以及与颗粒酶之间的协同作用机制仍不十分明确。本研究组在哺乳动物细胞中成功异位表达穿孔素的同时，发现穿孔素可以进入靶细胞内独立引发细胞凋亡，本研究拟通过蛋白分子的亚细胞定位分析以及多种凋亡检测手段对穿孔素蛋白杀伤靶细胞的机制进行进一步的研究。再运用细胞分泌杀伤模型和效靶细胞间免疫突触介导的细胞杀伤模型，明确穿孔素分子在独立发挥作用时，对靶细胞的杀伤活性和细胞毒效应。本项目的结果有望对穿孔素的新功能有更进一步的认识，并为其抗肿瘤应用奠定基础。

全长和截短型穿孔素基因克隆自细胞因子IL-2刺激的Jurkat细胞，这两种基因的异位表达都能够引起细胞凋亡，但全长型穿孔素同时促进细胞坏死。细胞凋亡可能是穿孔素对亚细胞器（如线粒体）的破坏所导致，而且能够被广谱caspases抑制剂Z-VAD-FMK或者线粒体的膜电位的保护剂Bcl-XL BH44-23逆转。异位表达的策略暗示了穿孔素潜在的凋亡诱导活性，而靶细胞的凋亡有助于机体的免疫监视和免疫防御，也提示穿孔素可以作为潜在的药物用于治疗。本研究将为深入阐明穿孔素在免疫活性细胞杀伤靶细胞中的作用及其诱导细胞凋亡的机理提供实验依据。