甜菜夜蛾中肠Cry2A特异性结合蛋白的鉴定及功能特性研究

Cry2A毒蛋白是转基因棉花抗性治理新策略（双基因策略）中应用的重要Bt毒素之一，Cry2A的应用不仅有效缓解了靶标害虫对转Cry1A基因棉花的抗性发展，而且扩大了转基因棉花的田间杀虫谱，提高了对甜菜夜蛾等重要鳞翅目害虫的防治效果。考虑到目前有关Cry2A对鳞翅目昆虫作用机制尚不明了，以及Cry2A在未来甜菜夜蛾综合防治中的重要作用，本项目拟采用单向和双向电泳、配体杂交、生物质谱等方法鉴定甜菜夜蛾中肠Cry2A特异性结合蛋白的种类；采用基因克隆及表达、碘标记、免疫荧光等技术分析甜菜夜蛾中肠Cry2A特异性结合蛋白与Cry2A的结合特性，深入研究Cry2A对甜菜夜蛾的作用机制。本研究结果将对揭示Cry2类毒素作用模式及靶标害虫对其产生抗性的机理奠定理论基础，同时对制定抗性治理策略、合理利用转Bt基因作物或Bt制剂具有重要意义。

Cry2A 蛋白是转基因棉花抗性治理新策略（双基因策略）中应用的重要Bt毒素之一，Cry2A 的应用不仅有效缓解了靶标害虫对转 Cry1A基因棉花的抗性发展，而且扩大了转基因棉花的田间杀虫谱，提高了对甜菜夜蛾等重要鳞翅目害虫的防治效果。但是，目前有关 Cry2A对鳞翅目昆虫作用机制尚不明了，本项目采用单向和双向电泳、酶联免疫杂交、生物质谱等方法鉴定了甜菜夜蛾中肠 Cry2A特异性结合蛋白的种类：主要包括aminopeptedase N，cadherin，Heat shock protein 70(90)，V-type ATPase unit，actin，polycalint，4-hydroxybutyrate CoA-transferase，Receptor for activated protein kinase C在内的多种Cry2Aa结合蛋白，采用基因克隆、表达、点杂交、免疫荧光等技术分析甜菜夜蛾中肠Cry2A 特异性结合蛋白与 Cry2A 的结合特性，结果显示在甜菜夜蛾中Cry2Aa与Cry1Ac没有相互竞争。最后，RNAi结果显示甜菜夜蛾cadherin，polycalin，V-ATPase A，actin为Cry2Aa的功能受体。本研究结果将对揭示 Cry2A类毒素作用模式及靶标害虫对其产生抗性的机理奠定理论基础，同时对制定抗性治理策略、合理利用转 Bt 基因作物或 Bt制剂具有重要意义。