14-3-3σ、ζ蛋白甲基化在子宫腺肌病的腺上皮细胞与间质细胞的差异性研究

本项目总结、分析前人工作，并结合自身前期工作基础，在发现确诊子宫腺肌病临床病理组织中，14-3-3σ/14-3-3ζ亚型基因启动子区域分别存在高/去甲基化的状况，拟分离、培养腺上皮细胞与间质细胞，采用基因克隆、RNA干扰以及转基因技术，建立相应的转基因细胞，以调整14-3-3σ与14-3-3ζ的甲基化状况；分别检测其细胞增殖率、迁移率、细胞周期以及凋亡情况；将相应的母本细胞以及转基因细胞，按不同组合异位接种至人工控制周期的裸鼠背部皮下，观察接种细胞的生长、增殖、浸润以及微血管密度情况，以求阐明14-3-3σ与14-3-3ζ的甲基化在子宫腺肌病组织腺上皮细胞与间质细胞中的差别及其意义，为深入了解子宫腺肌病发生、发展过程的分子生物学机制，奠定良好的理论与实验基础。

子宫腺肌病主要发生于育龄妇女，且经产妇多见。近年来国内外文献报道其发病率有明显上升趋势，已成为人们日益重视的妇科常见病、多发病。其发病机制复杂，学说甚多，至今未成定论。课题组总结、分析前人工作，并结合自身前期工作基础，在发现确诊子宫腺肌病临床病理组织中，14-3-3ζ亚型mRNA与蛋白显著上调，其基因启动子区CpG岛存在去甲基化状态。本项目分离纯化、培养了子宫腺肌病异位子宫内膜间质细胞（ESCs），采用基因克隆及转基因技术，建立相应的DNMT3A转基因细胞，以调整14-3-3ζ的甲基化状态；分别检测其细胞增殖率、迁移率、细胞凋亡及周期情况；将相应的母本细胞及转基因细胞，分别异位接种至人工控制生理周期的裸鼠背部皮下，观察接种细胞的生长、增殖等情况。. 结果发现：1）在临床确诊子宫腺肌病病理组织中甲基转移酶DNMT3A的mRNA与蛋白表达都显著下调；2）在子宫腺肌病ESCs中DNMT3A的mRNA及蛋白表达显著下调；3）在子宫腺肌病ESCs中14-3-3ζ的mRNA及蛋白表达显著上调，进一步的MSP结果显示其基因启动子CpG岛存在去甲基化状态；4）采用基因克隆及转基因技术，建立DNMT3A高表达转基因细胞，在转基因细胞中14-3-3ζ的去甲基化状态有所改善；5）检测到子宫腺肌病ESCs的增殖率及迁移率要高于正常对照ESCs及转基因细胞，细胞凋亡情况低于正常对照ESCs及转基因细胞；6）裸鼠皮下接种4周后，监测接种组织生长情况，结果表明：子宫腺肌病ESCs来源组织体积较正常对照ESCs和DNMT3A转基因细胞来源组织更大。. 本课题基本完成预期研究计划，培养博士生2名，硕士生3名。研究成果正在整理发表中。