长链非编码RNA SPRY4-IT1调控子痫前期滋养细胞凋亡的作用及机制研究

Preeclampsia (PE) is characterized by a series of maternal syndromes that includes hypertension, proteinuria, etc. Previous studies have shown that oxidative stress-induced p38 MAPK pathway activation is an important mechanism of PE trophoblast apoptosis. Our previous study have found that there was 11 times higher expression of long noncoding RNA (lncRNA) SPRY4 -IT1 in PE placenta by lncRNA chips and quantitative PCR analysis. And the apoptosis number of trophoblast cells were significantly increased when SPRY4 -IT1 was overexpressed. Accordingly, we are proposing an assumption of "SPRY4-IT1-miRNA-204-Pim-1- p38MAPK -apoptosis-PE" and this notion will be validated in human HTR-8/SVneo trophoblast cells and mice. We brought SPRY4-IT1 into the mechanism study of PE, and provided a new angle to reveal the mechanism of regulation of apoptosis. So it is hopeful to provide a theoretical basis for PE prevention in the future.

子痫前期（PE）系多因素所致的以高血压、蛋白尿为主要表现的妊娠特发疾病。氧化应激所致p38 MAPK信号通路激活是PE滋养细胞凋亡的重要机制，一直是凋亡研究的热点和难点。近年来长链非编码RNA作为调控细胞凋亡的上游机制正在被不断证实。课题组前期研究发现PE 胎盘组织长链非编码RNASPRY4-IT1呈11倍高表达，过表达SPRY4-IT1后滋养细胞凋亡显著增加。为进一步研究SPRY4-IT1在PE滋养细胞凋亡中的作用机制，课题组提出假设：长链非编码RNA SPRY4-IT1通过竞争性抑制miRNA-204作用，上调靶基因PIM-1表达，进而激活p38MAPK通路，导致胎盘滋养细胞凋亡，介导子痫前期发生。本研究拟通过在人滋养细胞及整体水平验证此假设。本课题将长链非编码RNASPRY4-IT1引入到PE发病机制研究中，有望从新的角度揭示PE滋养细胞凋亡的调控机制，为PE防治提供理论依据。

子痫前期为妊娠期特有性疾病，其仍是导致孕产妇死亡和围产儿死亡的主要原因。然而，该疾病的发病机制尚不明确，滋养细胞过度凋亡，子宫螺旋动脉重铸不足是公认的PE发病机制之一。近年来，长链非编码RNA作为新发现的分子可以参与调控细胞生物学功能，包括细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡等。lncRNA SPRY4-IT1位于染色体5q31.3长为708bp，首次与黑色素瘤中发现，并报道其在胎盘组织中高表达。本课题组通过定量PCR的方法检测了分别检测了25对正常孕妇和PE孕妇胎盘组织中的SPRY4-IT1的表达量。结果显示，子痫前期胎盘组织中SPRY4-IT1的表达量为正常胎盘组织中的2.8倍。由于SPRY4-IT1在PE胎盘组织中存在显著性差异表达，我们假设SPRY4-IT1可以通过影响滋养细胞的功能导致滋养细胞凋亡增加，子宫螺旋动脉重铸障碍进而参与子痫前期的发病过程。本研究通过（1）定量PCR检测25对正常孕妇和PE孕妇的胎盘组织中SPRY4-IT1表达，结果显示，子痫前期胎盘组织中SPRY4-IT1的表达量为正常胎盘组织中的2.8倍。（2）在人滋养细胞细胞HTR-8/SVneo中通过干扰和过表达长链SPRY4-IT1 检测滋养细胞功能的变化。合成si-SPRY4-IT1干扰序列，与此同时构件质粒pEGFP-N1- SPRY4-IT1，分别同时转染HTR-8/SVneo细胞，检测转染效率。干扰效率均达到70%以上。（3）用已检测过的转染效率高的干扰序列和质粒分别同时转染HTR-8/SVneo细胞，并检测其对细胞凋亡、增殖、迁移、侵袭、网状结构形成能力及细胞周期的影响。结果发现，在敲低SPRY4-IT1后，滋养细胞凋亡减少；增殖、迁移、网状结构形成能力增强。相反，在过表达SPRY4-IT1后，滋养细胞凋亡增多；增殖、迁移、网状结构形成能力减弱。（4）在转染HTR-8/SVneo后，提取细胞蛋白并采用Western blotting技术，检测凋亡通路相关蛋白表达，结果发现敲低SPRY4-IT1后，Caspase3、Cleaved-casepase3蛋白表达量下降，Bcl-2、Bax蛋白表达量升高，而过表达组结果相反。以上结果从细胞水平证实了lncRNA参与了子痫前期的发病，验证了我们的假说，并为子痫前期的防治提供了新的理论依据和研究靶点。