赤眼鳟TLRs家族对草鱼出血病毒（GCRV）的免疫应答机制研究

Both Barbel Chub (Spualiobarbus Curriculus) and Grass Carp (♀) × Barbel Chub (♂) distant hybrid F1 have higher resistance to Grass Carp Reovirus (GCRV) than Grass Carp . In order to explore the resistance mechanisms of new materials for disease-resistance breeding, Barbel Chub is used as the study object which based on the results of previous research. The full-length cDNA of TLRs family (TLR3, 7 and 22) will be cloned by RACE. The function of TLR3, 7 and 22 will be tested through siRNA interference and GFP technology. The Yeast Two-Hybrid System will be used to find out the signal pathway of TLR3, 7 and 22. The research will focus on the functions and immune mechanism of how the Toll-like Receptors Family recognized GCRV, and how the IFN、Mx and other effectors are induced and activated in Barbel Chub. The complex immune mechanisms of Barbel Chub resistance to GCRV will be explored. These results may explain why the Grass Carp (♀) × Barbel Chub（♂）distant hybrid F1 possess higher resistibility to GCRV and provide scientific evidence and new technology for the disease-resistant breeding in grass carp.

赤眼鳟（Spualiobarbus Curriculus）和草鱼（♀）×赤眼鳟(♂)远缘杂交F1对草鱼出血病病毒（GCRV）均有良好抗性。本项目为探明抗病育种新材料的抗病机理，在前期研究基础上，以赤眼鳟为材料，选择TLRs家族，采用RACE技术克隆TLR3、7、22的cDNA全长，探究其结构和功能特征；通过siRNA干扰技术和GFP标记技术对TLR3、7、22进行功能验证；应用酵母双杂交技术，确定TLR3、7、22的信号通路；重点探讨TLRs家族在GCRV识别，IFN、Mx等效应分子产生及激活获得性免疫反应等功能和调控机制，系统研究赤眼鳟对GCRV的免疫机理。旨在从源头上解释远缘杂交F1的抗性，为草鱼抗病育种奠定新的技术基础和科学依据。

赤眼鳟（SpualiobarbusCurriculus）和草鱼（♀）×赤眼鳟（♂）远缘杂交F1对草鱼出血病病毒（GCRV）均有良好抗性。为探明抗病育种新材料的抗病机理，以赤眼鳟为材料，完成了两部分内容。首先，采用RACE技术克隆了14个TLRs家族及相关基因的cDNA全长，分别对其结构域，蛋白质结构及进化关系等生物信息学进行分析。赤眼鳟TLR3，TLR7，TLR8，TLR9，TLR19及TLR22均具有“马蹄形”LRR跨膜结构域。在GCRV感染赤眼鳟前后，不同组织中14个基因表达量均有变化，表达模式多为先上升达到表达峰值后再逐渐下降。此外，通过草鱼与赤眼鳟感染GCRV前后头肾比较转录组得到表达差异显著的基因共594个，表达上调基因482个，下调112个。其次，利用细胞过表达，荧光定量技术检测到TLRs家族及相关基因可以诱导下游因子IFN-I和Mx基因的表达。在对TLRs家族下游基因IRF3基因的研究中，过表达赤眼鳟IRF3可以通过增加表达量进而诱导下游IFN-I基因的表达。另外，通过酵母双杂交技术筛选到赤眼鳟TLR8蛋白与Snapin蛋白存在相互作用，这确定了TLR7亚家族的部分信号通路。以上两部分研究结果着重探讨TLRs家族在GCRV识别后的表达模式，及IFN-I和Mx等效应分子产生，激活获得性免疫反应等功能和调控机制。这从源头上解释远缘杂交F1的抗性，为草鱼抗病育种奠定新的技术基础和科学根据。