骨髓间充质干细胞对GVHD和GVL的作用及联合移植策略的研究

移植物抗宿主病（GVHD）是异基因造血干细胞移植的严重并发症，仍未有满意疗法。我们的基础和临床研究初步表明间充质干细胞（MSCs）具有造血支持和免疫调节作用，与造血干细胞联合移植可加速造血恢复，降低GVHD发生率及严重程度。但MSCs抑制GVHD的机制未明，MSCs在抑制GVHD的同时是否会导致移植物抗白血病（GVL）作用的降低，从而导致肿瘤复发增加，尚未明确。本研究拟建立高度模拟人体的可在同一受体内观察GVHD和GVL的大鼠模型，通过优化MSCs的输注剂量、时机或共同移植经MSCs在体外诱导的免疫调节细胞（Regc）等策略，使得MSCs抑制GVHD的同时最大限度保留GVL作用，提高受体的无病存活率。此外，本研究拟采用增强性绿色荧光蛋白（EGFP）和Y染色体双标记的方法，长期追踪观察MSCs在受体内的迁移、归巢和植入情况，为MSCs抑制GVHD机制的阐明及临床如何使用MSCs提供实验依据。

中文摘要：移植物抗宿主病（GVHD）是异基因造血干细胞移植的严重并发症，仍未有满意疗法。我们的基础和临床研究初步表明间充质干细胞（MSCs）具有造血支持和免疫调节作用，与造血干细胞联合移植可加速造血恢复，降低GVHD发生率及严重程度。但MSCs抑制GVHD的机制未明，MSCs在抑制GVHD的同时是否会导致移植物抗白血病（GVL）作用的降低，从而导致肿瘤复发增加，尚未明确。本研究拟在体外研究人MSCs及其不同成分对造血干细胞（HSC）扩增及其对活化T细胞的作用，以及MSC在体外诱导外周血单个核细胞转变为具有免疫抑制作用的免疫调节细胞（RegC）对活化T细胞抑制作用的机制，以进一步明确MSCs对GVHD/GVL的可能作用机制，以及是否可以通过使用MSC的相关成分或产品治疗GVHD，从而使其更方便的应用于临床。本项目还进一步研究了MSC表面不同亚型TLR受体的激活对MSC的免疫调节效应的影响，提示在不同损伤或炎症背景下，MSC的治疗结果可能有差异，因此应根据个体差异制定更合理的MSC应用方案，以上研究国内外尚未见相关报道，值得深入探讨。在体外实验的基础上，拟建立高度模拟人体的可在同一受体内观察GVHD和GVL的大鼠模型，通过优化MSCs的输注剂量、时机或共同移植RegC等策略，使得MSCs抑制GVHD的同时最大限度保留GVL作用，提高受体的无病存活率。此外，本研究拟采用增强性绿色荧光蛋白（EGFP）和Y染色体双标记的方法，长期追踪观察MSCs在受体内的迁移、归巢和植入情况，为MSCs抑制GVHD机制的阐明及临床如何使用MSCs提供实验依据。体内部分按照计划已经完成大鼠MSCs的培养、EGFP标记、部分体外免疫功能检测。但在构建模型时发现国内无法买到大鼠白血病细胞株，只好改用小鼠GVHD/GVL动物模型。由于小鼠骨髓MSCs培养困难，增殖周期长，且小鼠不能进行骨髓穿刺术等连续在体观察，每个时间点皆需要杀死小鼠，导致工作量增加，实验进度受到明显影响。目前已建立小鼠骨髓和脂肪MSC纯化和扩增体系，成功转染EGFP。完成了小鼠GVHD模型的建立及不同MSC输注时间和不同MSC输注剂量对GVHD的抑制作用的观察。但小鼠GVHD/GVL模型的建立还在摸索阶段。