miR-29b/DNMT/lincRNA-p21的抗肝纤维化研究

Non-coding RNA is a class of RNA that can’t translate the proteins. Currently, the studies focused on the fields of siRNA and miRNA. But there were few researches on lncRNAs. Our previous studies showed that miR-29b could regulate the gene by targeting DNA methyltransferase. Based on these findings, this project will take lncRNAs as the breakthrough point and explore the possibility of epigenetic modification of lincRNA-p21 regulated by miR-29b. In addition, we will screen and verify the target gene of lincRNA-p21 by bioinformatics, RNA pull down and RIP experiments. We will expound the anti-hepatic fibrosis mechanism of lincRNA-p21 from the perspective of protein ubiquitination, contributing to the understanding of the pathogenesis of hepatic fibrosis. This project will provide new ideas and new methods for prevention and treatment of liver fibrosis and have a strong theoretical significance and application prospects.

非编码RNA是一类不编码蛋白质的RNA。当前研究主要集中于siRNA和miRNA领域，而对lncRNA研究很少。我们过去的研究表明，miR-29b能靶向DNA甲基转移酶从而对靶基因产生调控作用。本课题拟在这些线索的基础上，结合国内外最新进展，以lncRNA为切入点，探讨miR-29b通过表观遗传学修饰调控lincRNA-p21的可能性。另外，我们通过生物信息学、RNA pull down、RIP等实验筛选并验证lincRNA-p21的靶基因，从蛋白泛素化角度阐述lincRNA-p21的抗肝纤维化机制，这有助于加深我们对肝纤维化发生机制的理解。本课题的实施，为防治肝纤维化提供了新思路和新策略，具有很强的理论意义和应用前景。

越来越多的研究表明lncRNA涉及诸多重要的生物学进程。本研究通过检测纤维化相关基因如α-SMA及 COL1A1的表达、细胞周期、细胞增殖、寻找lincRNA-p21靶基因以及检测lincRNA-p21启动子甲基化等方式确证lincRNA-p21的抗纤维化作用。结果显示，lincRNA-p21在肝纤维化小鼠体内外模型中其表达呈现明显下降。在功能方面，过表达的lincRNA-p21能有效地抑制肝纤维化进程。肝星状细胞体外模型显示，lincRNA-p21过表达组的细胞相对正常组而言，形态上呈现出胞质萎缩且体形更小，同时细胞的数量大幅减少。与形态的改变相符，过表达组内的肝星状细胞α-SMA及Col1A1 mRNA含量均呈现下调。在体内实验方面，四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化可被过表达的lincRNA-p21所抑制。在机制方面，我们证实了lincRNA-p21的抗纤维化能力与p21有关。更为深入的研究显示，该项调控途径与p53的泛素化方式存在一定关联。在lincRNA-p21上游机制方面，则发现lincRNA-p21在肝纤维化中的表达下降与其启动子高度甲基化密切相关。此外，研究还发现lincRNA-p21能海绵性吸附miR-17-5p调控Wnt信号途径影响肝纤维化进程。该项研究揭示了lincRNA-p21在肝纤维化中的表达、作用及其可能的作用机制。在此研究基础上，也明确了一些新的肝纤维化相关分子如HOTAIR、MEG3及NEAT1等等。. 在国自然青年基金的资助下，以第一作者或通讯作者身份发表SCI 13篇（累计超过60分）和国家自然科学基金面上项目一项。