登革病毒通用型Th-CTL表位肽嵌合疫苗研制和免疫学效应研究

登革病毒（DENV）非中和抗体通过ADE效应加重DENV感染，而DENV的Th细胞和CTL对机体具有保护效应。本课题拟合成DENV候选Th表位、CTL表位，采用竞争性ELISA方法和MHC-肽复合物稳定性实验验证候选Th表位同8个主要HLA-DR分子的结合力，候选CTL表位同HLA-A2、A11、A24分子的结合力；基于DENV感染者外周血单个核细胞（PBMCs），采用酶联免疫斑点实验（ELISPOT）和细胞内细胞因子染色（ICS）鉴定Th表位、CTL表位；基于鉴定的表位制备DENV通用型Th-CTL表位肽嵌合疫苗；基于未感染DENV健康者的PBMCs，采用ELISPOT、ICS和CTL杀伤实验研究上述疫苗体外免疫学效应；基于HLA-A2和HLA-A24转基因小鼠，采用ELISPOT、ICS和CTL杀伤实验研究上述疫苗体内免疫学效应。本项目将为研发可用于临床的DENV新型疫苗奠定实验基础！

登革病毒（DENV）特异性Th细胞（CD4+ T细胞）和CTL（细胞毒性T细胞，CD8+ T细胞）具有保护效应。我们合成了登革病毒1型（DENV-1）的23条候选T细胞表位，竞争性肽结合实验和MHC-肽复合物稳定性实验证实4条候选Th表位同HLA-DR具高结合力（NS4b172-184IMLLILCTSQILL受HLA-DR4、DR7、DR8限制，NS3218-230RTLILAPTRVVAS受HLA-DR3、DR4、DR8、DR13、DR15限制，C44-56MKLVMAFMAFLRF受HLA-DR1、DR15限制，NS3266-278FTMRLLSPVRVPN受HLA-DR8、DR11限制），3条候选CTL表位（NS4a140-148GLLFMILTV，NS2a144-152QLWAALLSL和NS4b183-191LLMRTTWAL）受HLA-A2限制，6条CTL表位（NS4b159-167VVYDAKFEK，NS2b15-23SILLSSLLK，NS5561-569 ALLATSIFK，NS5505-513 GVEGEGLHK，NS399-107AVEPGKNPK和E39-47PTLDIELLK）受HLA-A11限制，5条CTL表位（NS4a40-48AYRHAMEEL，NS5880-888DYMTSMKRF，NS3472-480QYIYMGQPL，NS3548-556 SYKVASEGF和NS322-30IYRILQRGL）受HLA-A24限制；ELISPOT实验和CTL杀伤实验证实DENV-1感染的人外周血单个核细胞可以识别上述表位；ELISPOT实验，流式细胞术和CTL杀伤实验表明上述14条CTL表位免疫HLA-A2、A11、A24转基因小鼠均可诱导CTL反应；我们将编码上述18个Th表位和CTL表位以及之前鉴定的1条CTL表位（NS4b40-48TLYAVATTI）和2条Th表位（NS323-35YRILQRGLLGRSQ和NS3141-155NREGKIVGLYGNGVV）的核苷酸序列克隆入pcDNA3.1(+)质粒制备成了登革病毒多表位DNA疫苗；ELISPOT实验和CTL杀伤实验证实此DNA疫苗免疫HLA-A2、A11、A24转基因小鼠可产生针对每条CTL表位的CTL反应。此DNA疫苗具广泛人群覆盖率和潜在应用前景，可产生重要的经济和社会效益！