鸽呼吸道上皮细胞流感病毒受体SAα2,6Gal的定位及其在A型流感病毒致病作用中的研究

A型流感病毒的受体优先结合特性与宿主呼吸道上皮细胞表面流感病毒受体类型（唾液酸半乳糖连接键型）对流感病毒的致病性是否起到关键作用，是关注的焦点。在发现和证实鸽对H5N1亚型禽流感病毒不易感及鸽呼吸道上皮细胞流感病毒的受体为SAα2,6Gal的基础上，基于SAα2,6Gal的定位及作用，本研究拟开展：（1）鸽呼吸道上皮细胞的形态学观察；（2）SAα2,6Gal在鸽呼吸道上皮细胞中位置的确定；（3）禽流感病毒感染具有SAα2,6Gal和SAα2,3Gal受体呼吸道上皮细胞类型及流感病毒糖蛋白的检测；（4）具有不同受体结合特性A型流感病毒（人、禽、猪、马源）的筛选；（5）鸽对A型流感病毒（H9N2、H1N1、H3N2、H3N8）的易感性试验。预期的成果为（1）确定鸽SAα2,6Gal的位置及受体和病毒感染的关系，明确流感病毒受体在A型流感病毒致病中的作用，解释鸽对H5N1亚型禽流感病毒不易感。

A型流感病毒的感染与病毒表面血凝素识别受体特异性和宿主细胞表面唾液酸受体类型有关。本研究主要回答气管上皮细胞表面表达SAα2,6Gal受体的鸽对具有不同受体结合特性的流感病毒易感性，并评价呼吸道上皮细胞表面流感病毒受体在流感病毒感染过程中的作用。. 主要研究成果如下：（1）应用扫描电镜观察鸽和鸡呼吸道的超微结构，发现鸽和鸡喉头主要分布纤毛上皮细胞，非纤毛上皮细胞数量很少，气管上、中、下段无纤毛细胞分布开始增多，但仍以纤毛上皮细胞为主；（2）依据受体染色法对鸽和鸡呼吸道上皮细胞受体类型的检测，结合形态学观察，流感病毒受体SAα2,6Gal和SAα2,3Gal主要存在于鸽或鸡呼吸道纤毛上皮细胞的纤毛和细胞膜上，杯状细胞表面不存在流感病毒受体；（3）采用唾液酸酶转移法和HA基因序列受体结合位点分析法，确定了H5N1和H9N2亚型禽流感病毒以及H3N8亚型马流感病毒优先结合SAα2,3Gal受体，H1N1亚型猪流感病毒对SAα2,3Gal和SAα2,6Gal受体均结合，人源甲型H1N1亚型流感病毒优先结合SAα2,6Gal；（4）用人源甲型H1N1亚型流感病毒、H1N1亚型猪流感病毒、H9N2亚型禽流感病毒和H7N9亚型禽流感病毒以不同的攻毒剂量和攻毒途径（包括同居感染）对140羽鸽和116只SPF鸡进行人工感染试验，通过对试验鸽和SPF鸡进行临床症状、大体病变、组织学病变的观察及病毒抗原的定位、咽部病毒分离和感染抗体的测定，评价流感病毒受体在A型流感病毒致病过程中的作用，研究结果表明：试验用人源甲型H1N1亚型流感病毒（主要结合SAα2,6Gal受体）、H1N1亚型猪流感病毒（对两种受体均有结合特性）、H9N2亚型禽流感病毒和H7N9亚型禽流感病毒（主要结合SAα2,3Gal受体）不能够感染鸽。. 鸽呼吸道上皮细胞表面不表达禽流感病毒优先结合的SAα2,3Gal受体，解释了试验用H9N2和 H7N9亚型等禽流感病毒不感染鸽的结果；鸽呼吸道细胞表面主要表达人流感病毒能够结合的SAα2,6Gal，但试验用人源甲型H1N1亚型流感病毒也不能够感染鸽。结论：（1）鸽不是试验用流感病毒的自然宿主；（2）流感病毒受体学说不能够完全解释A型流感病毒的分子致病机制，具有SAα2,6Gal受体结合特性的流感病毒，不能够一定感染呼吸道上皮细胞表面表达SAα2,6Gal受体的宿主。