犬源流感病毒致病机制及其分子演化的研究

本课题拟以近年来分离自我国华南地区犬源流感病毒为研究对象，利用本实验室良好的工作条件（BSL3）和先进的仪器设备，对影响我国的犬源流感的病原学、流行病学、病毒传播及致病分子机制等方面开展研究，通过血清学、病原学、分子流行病学、生物信息学等方法和手段，分析我国犬源流感的分子进化规律，摸清我国犬源流感的流行规律，通过各代表性毒株对不同种属动物（犬、小鼠、家禽等）间的感染及致病性试验，分析我国犬源流感在不同种属动物间的感染、传播及致病的能力及差异，揭示犬源流感在人、哺乳动物及家禽之间的传播机制。同时利用反向遗传操作技术，在分子水平上研究犬源流感病毒在不同种属间的传播及致病的分子机制，为犬源流感及人流感的预防和控制、犬源流感的流行预警、新型基因工程修饰或致弱流感疫苗的研制及新型抗流感药物的研制提供全面、准确、直接的理论依据和科学研究基础。

本课题以近年来分离自我国华南地区犬源流感病毒为研究对象，利用本实验室良好的工作条件和先进的仪器设备，对影响我省乃至我国的犬源流感的病原、流行病学、传播及致病分子机制等开展研究，通过血清学、病原学、分子流行病学、生物信息学等方法和手段，分离出7株CIV，建立了犬源流感病毒库，并初步掌握了广州市犬流感病毒血清学和病原学流行规律。利用生物信息学，分析了不同毒株关键位点的差异，7株CIV与亚洲犬源和禽源H3N2亚型流感病毒的基因属于一个分支，且与亚洲分离到的CIV亲源关系最近；与人源和猪源的H3N2亚型流感病毒的基因在进化上属于不同的分支，亲缘关系相对较远；与美国的犬源和马源流感病毒的基因也属于不同的分支，亲缘关系最远。利用特异性引物扩增CGZ3株的PB1、PB2、PA、HA、NA、NP、△M、NS基因，其中在M基因进行沉默突变，从而产生一个新的酶切位点，以区分拯救毒和野毒方法，成功拯救出1株犬流感病毒。影响流感病毒传染性和致病性的分子机制，可能是一种多位点和/或多基因协同作用的结果，而只有这种协同作用达到一个最佳的“状态”时，才能保证病毒在高效地复制和传播，并引起动物死亡。通过猫、犬和小鼠犬流感病毒感染模型分析，犬流感病毒可以使猫、犬和小鼠感染上犬流感病毒，虽然只出现一定程度的临床症状并不致死，在一定时间内可以自行清除，但是犬流感病毒具有跨宿主传播的风险。另外，从受体角度分析犬源流感能否能适应新宿主——犬，从而为犬源流感及人犬源流感的预防和控制、犬源流感大流行的预警、新型的基因工程修饰或致弱流感疫苗的研制及新的抗流感药物的研制提供全面、准确、直接的科学依据和研究基础。