AEG-1介导的细胞自噬在肾癌细胞侵袭和转移中的作用及分子机制

AEG-1在多种肿瘤组织的表达均显著升高，其促进肿瘤细胞增殖、侵袭和转移的作用已被证实且与其激活PI3K/Akt信号通路密切相关。PI3K/Akt也是细胞自噬负性调控的重要信号传导通路之一，而自噬作为应激状态下细胞启动的溶酶体依赖性降解途径，具有保护细胞和维持细胞生存的功能。我们前期研究已证实肾癌中存在AEG-1上调并可促进肾癌细胞的侵袭转移，进一步的实验及最新的研究报道均证明AEG-1上调可促进细胞的保护性自噬。然而，AEG-1促进肾癌侵袭的作用是否与其促进保护性自噬有关，且其作为PI3K/Akt的正性调控因子为什么反而上调了细胞自噬，机制尚不清楚。本课题拟通过细胞和动物实验，探讨自噬在AEG-1上调后介导的肿瘤生长、侵袭和转移中的作用，以明确AMPK-mTOR信号通路调控的自噬对AEG-1促进肾癌细胞侵袭和转移的影响，从维护肿瘤细胞自身稳定、减少细胞凋亡的角度探讨AEG-1的促癌机制。

研究背景.肾细胞癌（reanl cell carcinoma, RCC）是来源于肾小管上皮细胞的泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一。转移性肾细胞癌目前仍无有效的治疗手段，预后极差。AEG-1（astrocyte elevated gene-1）是新近发现的一个基因，具有类似癌基因样作用。有关AEG-1在肾细胞癌的发生、发展过程中的作用，目前尚无相关的研究。.研究内容及关键数据.一．AEG-1在肾细胞癌组织和细胞株中的表达.AEG-1在正常肾组织主要表达于远端小管和集合管细胞浆，未见胞核表达； AEG-1的mRNA和蛋白在肾细胞癌组织的表达较癌旁组织显著升高（2-38）倍；4种肾癌细胞株中AEG-1的水平较人正常小管上皮细胞HK-2显著升高（2-12倍），其中转移性肾癌细胞株Caki-1的表达水平最高。.二．AEG-1的表达水平与肾细胞癌进展及转移的关系.102例肾细胞癌组织中96例患者(94.1%)可检测到AEG-1蛋白的上调，透明细胞、乳头状、嫌色细胞癌和集合管癌四种组织学类型均可见AEG-1蛋白表达的显著上调；86例透明细胞癌和10例乳头状癌患者AEG-1表达水平与核级呈显著正相关(P <0.001)，并且与临床分期(P = 0.003)、肿瘤的大小(P = 0.003)及转移(P=0.032)相关，与淋巴结转移无显著相关性（P=0.457）；AEG-1高表达组患者的5年累积生存率仅为52.4%，显著低于AEG-1低表达组的91.3%(P=0.002)； MVD在不同核级肾细胞癌之间存在显著性差异，随着核级的增加，MVD随之增加，并与AEG-1蛋白表达水平正相关（P=0.010，r=0.455）。.三．调控AEG-1基因对肾透明细胞癌细胞株的影响. AEG-1 siRNA干扰786-0细胞后MTT显示AEG-1siRNA干扰组786-0细胞生长减慢 (P<0.05)；Matrigel侵袭实验法显示AEG-1siRNA干扰组细胞侵袭能力下降；流式细胞术分析表明凋亡细胞比例增加。.科学意义.我们的研究结果证实AEG-1蛋白在肾细胞癌细胞和组织均较其相应的正常组织和细胞存在显著上调，各型肾细胞癌均存在其上调表达，且表达水平与肿瘤的进展和转移相关；AEG-1蛋白高表达提示预后较差； AEG-1的表达与MVD呈显著正相关，提示AEG-1蛋白的高表达可能通过影响肿瘤的微血管生成。