豨莶草肺毒性的作用机理及物质基础研究

We have conducted a systematic study on Siegesbeckiae which is recorded as non-toxic Herba in Chinese Pharmacopoeia. We will improve the extraction technique to separate the toxic substance of Siegesbeckiae and clarify the material basis of its toxicity. Then we will explore the role of α7nAChR to regulate the efficacy and toxicity of the Siegesbeckiae aqueous portion on molecular levels and the mechanism of pulmonary toxicity of Siegesbeckiae toxic substances. Finally, we will observe the efficacy and drug safety of Siegesbeckiae when toxic substances being removed to provide a scientific basis for reasonable application of Siegesbeckiae.

基于前期对《中国药典》记载无毒中药豨莶草毒性作用的系统研究，采用豨莶草为受试药物，完善豨莶草毒性物质提取工艺，解决毒性化合物极易分解的难点，探明豨莶草毒性的物质基础；应用分子生物学技术探索α7nAchR的表达在豨莶草水溶部位药效与毒性中的双向调节作用，系统研究豨莶草的毒性物质和肺毒性的作用机理，并观测剔除豨莶草中毒性物质后豨莶草的药效和用药安全性，为豨莶草的合理应用提供科学依据。

本课题经2017.1-2020.12四年完成。研究内容包括：通过不同提取工艺追踪豨莶草的毒性成分，发现该药的毒性成分在水洗脱部位；水洗脱部位（SJW-C2）富集晶体经薄层色谱（TLC）、高效液相色谱（HPLC）、液质联用（LC-MS）检测结果表明，富集晶体极性大，主要成分是无机盐，有机物含量极微，提取单体困难；应用分子生物学手段证实豨莶草水洗脱部位（SWES）（≥6 mg·ml-1）对MRC-5细胞具有明显的毒性作用；SWES对MRC-5细胞α7nAchR基因表达实验表明SWES可增高MRC-5细胞α7nAchR基因表达，降低炎症因子水平，二者之间呈负相关性，金黄地鼠、冠状病毒感染小鼠的体内实验与体外细胞实验结果一致；α7nAchR基因沉默实验表明SWES含有α7nAchR激动剂样物质（至今尚未发现其他中药水煎剂或提取物中含有α7nAChR激动剂的报道），该物质可增高MRC-5细胞α7nAchR基因表达，降低炎症因子水平；前期反复通过急性毒性实验发现SWES灌胃给药后小鼠出现静止俯卧、颜面青紫、蜷缩、间歇性惊厥、震颤等表现，这些反应与乙酰胆碱(ACh)在体内蓄积的烟碱样（N样）症状相似，而α7nAchR激动剂具有ACh样作用，故我们推测过量的α7nAchR激动剂样物质可能是豨莶草的毒性成分之一，这一结论具有原创性，迄今为止尚未见国内外文献报道。在完成以上课题内容的同时进行了抑癌及降脂实验研究，发现SWES具有调脂及抑制肝癌和肺癌细胞株的作用。