基于Wnt/β-catenin信号通路研究化痰通瘀解毒方抗胃癌作用机制

Wnt/β-catenin信号通路与肿瘤的恶性增殖、血管新生和侵袭转移密切相关。中医认为，痰瘀毒结是贯穿肿瘤发生、发展过程的基本病理，解毒化痰行瘀是其根本治疗大法。既往研究显示：化痰通瘀解毒方能够显著抑制小鼠移植瘤的生长和人胃癌、肝癌细胞增殖，并显著抑制小鼠移植瘤组织VEGF表达，降低瘤组织微血管密度。本项目拟在既往研究基础上，以Wnt/β-catenin信号通路为切入点，以裸鼠移植人胃癌模型和胃癌细胞系MKN-45、SGC-7901、HGC-27模型为研究对象，采用血清药理学方法及RT-PCR、Western blot、免疫组织化学、免疫荧光、流式细胞术等技术，观察Wnt/β-catenin信号通路相关基因的表达，从体内、体外两方面研究不同分化程度胃癌细胞生长、侵袭、转移与Wnt/β-catenin信号通路的相关性，以及化痰通瘀解毒方的干预效应，进一步揭示化痰通瘀解毒方抗胃癌作用机制。

胃癌是全球最常见的消化道恶性肿瘤之一，复发、转移是导致胃癌治疗失败的关键因素，也是引起胃癌患者死亡的主要原因之一。预防胃癌复发转移是临床肿瘤学界面临的巨大挑战，发掘天然高效、无毒或低毒、靶向明确的胃癌治疗药物具有十分重要的现实意义。化痰毒通瘀解方具有化痰破瘀、通腑解毒功效，能改善中晚期胃癌患者生存质量，预防复发转移。既往实验研究显示，该方能够抑制小鼠移植瘤生长及人胃癌细胞、肝癌细胞增殖，降低移植瘤组织微血管密度、抑制移植瘤组织VEGF表达。本项目在既往研究基础上，对化痰通瘀解毒方抗胃癌侵袭转移作用及其与Wnt/β-catenin信号通路的相关性机制进行了深入研究，研究结果显示：（1）化痰通瘀解毒方(82.68、41.34、20.67g生药 / kg)能抑制裸鼠人胃癌SGC-7901移植瘤增殖，抑制其β-catenin、C-Myc、VEGF蛋白表达，上调其GSK-3β蛋白的表达。（2）化痰通瘀解毒方水煮醇沉提取物（10-40μg/ml）对人胃癌SGC-7901细胞细胞侵袭、迁移能力具有显著抑制作用（trancewell实验），明显抑制细胞MMP-9、E-cadherin、VEGF蛋白过表达；且抑制作用呈剂量依赖性；（3）化痰通瘀解毒方水煮醇沉提取物（10-20μg/ml）能够上调被LiCl特异性抑制的GSK-3β蛋白表达，下调Wnt/β-catenin信号通路关键分子Wnt1、β-catenin、p-GSK3β、TCF4、c-Myc及其下游靶分子COX-2、VEGF和MMP-9蛋白表达; 并能下调β-catenin mRNA、c-Myc mRNA和COX-2 mRNA和VEGF mRNA 基因表达，在5-20μg/ml范围内呈现一定的剂量依赖关系；表明化痰通瘀解毒方抗胃癌侵袭转移作用与其调控Wnt/β-catenin信号通路及其下游相关蛋白基因表达关系密切。. 以上研究结果表明，化痰通瘀解毒方具有抑制人胃癌侵袭转移作用，该作用与其调控wnt/β-catenin信号通路相关蛋白wnt1α、β-catenin、GSK-3β、pGSK-3β、TCF4和c-Myc蛋白、基因表达，从从而抑制其下游相关蛋白COX-2、VEGF、 MMP-9、E-cadherin过表达有密切关系。