宫颈癌干细胞的分离与功能鉴定

宫颈癌是严重危害妇女健康的主要恶性肿瘤之一，每年有超过100万的人面临手术、放化疗带来的困扰及复发与死亡的威胁。根据肿瘤干细胞学说的观点，宫颈癌中一定存在宫颈癌干细胞，它们数量稀少、慢分化、耐放化疗，是影响疗效及预后的根源。因此针对宫颈癌干细胞展开靶项治疗将是根治宫颈癌的关键。本研究拟采用流式细胞仪技术，利用乳腺癌耐药蛋白（breast cancer resistance protein 1，Bcrp1）这个通用的干细胞标记物对宫颈癌细胞进行分选，并通过体内和体外试验对其进行功能鉴定，进一步验证宫颈癌Bcrp1+亚群中含有宫颈癌干细胞的推测。并根据宫颈癌干细胞具有抵抗放射辐射能力的理论，利用放射线分不同放射剂量和强度，对抗辐射的宫颈癌Bcrp1+亚群细胞进行分选，并对其进行功能鉴定，从而为宫颈癌放化疗抵抗机理的研究及靶向治疗提供线索。

肿瘤干细胞学说认为肿瘤干细胞是肿瘤发生与复发的根源，针对肿瘤干细胞展开靶向治疗是肿瘤治疗的新方向。由于缺乏公认的宫颈干细胞标记物，使宫颈癌干细胞的研究极为困难，目前尚未分离出宫颈癌干细胞，也无明确的宫颈癌干细胞表面标记物。虽然，有学者采用SP法或无血清悬浮培养法，分离出了宫颈癌干细胞样细胞，但它仍不够纯化，更缺乏对表面标记的研究报道。如何筛选出宫颈癌干细胞表面标记物是宫颈癌干细胞研究的关键问题。本课题组针对宫颈癌干细胞表面标记物缺乏这一特点入手，采用乳腺癌耐药蛋白（Bcrp1），及无血清悬浮成球培养2种方法对宫颈癌Hela及宫颈癌原代细胞进行分选，并采用体实验及体外实验对两类细胞进行了功能鉴定工作。结果证实Bcrp1+亚群细胞及无血清成球培养细胞可能是富集了宫颈癌干细胞的细胞群。为宫颈癌干细胞表面标记物的研究及靶向治疗研究打下了基础。主要研究成果如下：.1、本课题组对宫颈癌原代细胞进行培养，经移植瘤实验证实，该细胞株可反复成瘤并稳定传代，生物学性能可靠。.2.本课题组在Hela及宫颈癌原代中分选出Bcrp1+细胞亚群,并对其进行成瘤力、侵袭转移能力、抗凋亡及抗放疗能力的鉴定，证实，Bcrp1+的Hela及宫颈癌原代细胞亚群中，较阴性组比，富集了宫颈癌干细胞。本研究在体内、及体外均证实了Bcrp1+亚群细胞的功能，在国内尚属领先。.3.本课题组已在宫颈癌Hela及宫颈癌原代中培养出无血清成球培养细胞，将成球细胞与贴壁细胞分别接种NOD/SCID小鼠，结果发现，成球细胞组致瘤力强于阴性组，成球组具有较强的致瘤力。该项研究随不是国内首例，但是亦属领先水平。