长春花培养细胞抗癌生物碱合成途径的遗传操作

长春花中含有130多种生物碱，对抗菌止血、镇痛、利尿和治疗高血压及多种癌症具有显著疗效，因此长春花药用成分，特别是具有治疗何杰金氏病、恶性淋巴肿瘤、急性白血病、绒毛上皮细胞癌等作用的双吲哚生物碱的研究和开发受到广泛关注。目前国际市场上对长春花抗癌生物碱的需求远远不能满足。由于从长春花植株中直接提取的药用成分含量极低，所以急需提高抗癌药用成分的积累水平来解决市场供需矛盾。本申请拟采用细胞培养和遗传操作技术来摸索生产双吲哚生物碱的替代途径。拟首先从长春花中克隆吲哚生物碱合成途径中3种关键酶基因的编码cDNA，然后构建过表达载体；通过对受体长春花细胞系的遗传转化和筛选，获得过表达这些基因的转基因长春花细胞系；研究获得转双基因和转三基因的方法和途径，以获得转多基因的转化细胞系；分析对比各种转基因细胞系和未转基因细胞系有效药用成分含量的差异。