表型分选的骨髓间充质干细胞移植治疗萎缩性胃炎的机制研究

萎缩性胃炎作为胃癌前期变化的一种疾病，随年龄的增长，其发病率逐年升高。干细胞在再生领域所取得的巨大的进展，为萎缩性胃炎的治疗提供了新的视角。在前期研究中，我们建立了胃炎的动物模型，并发现骨髓间充质干细胞能定植于受损的胃粘膜，具促进损伤胃粘膜的修复作用，但具体机制尚不清楚。本研究拟在前期研究基础上，建立稳定的萎缩性胃炎动物模型，采用免疫磁珠分选表达Lin-CD44hiScal-cKitCD34- 的骨髓间充质干细胞，移植入雌性模型鼠体内；应用荧光染色料示踪及Y染色体杂交技术，观察其在模型鼠胃粘膜的定植；通过免疫组织化学、ELISA及流式细胞技术探讨依据特定表型分选的骨髓间充质干细胞参与萎缩胃粘膜的修复机制。为特定表型的骨髓间充质干细胞移植逆转萎缩胃粘膜提供理论依据，同时也为萎缩性胃炎的治疗探索新的途径。

.研究内容与结果：（1）胃癌前病变-胃癌大鼠模型的建立 应用MNNG建立Wistar大鼠胃癌前病变-胃癌的大鼠模型，胃病理学结果显示在慢性萎缩胃炎基础上，出现了异型增生、肠化等胃癌前病变。萎缩+肠化+异型增生的总发生率为90.9%。其中20只大鼠进一步延长喂养时间一个月后，病理学证实部分大鼠可出现胃癌。（2）MSCs在胃癌前病变模型大鼠体内定植与微环境影响 标记的MSCs经尾静脉注射至胃癌前病变大鼠体内，胃组织内可见MSCs细胞，证明MSCs可定植在胃癌前病变大鼠胃粘膜。VEGF表达水平在胃癌前病变大鼠干细胞移植组和非细胞移植组均较对照组升高（P<0.01），且干细胞移植组VEGF表达水平较非细胞移植组明显增加（P<0.01）。与空白对照大鼠比较,胃癌前病变大鼠干细胞移植组和非细胞移植组血清中的IL-17和IFN-γ含量均升高，差异有统计学意义(P<0.01, P<0.05)。（3）锰超氧化物歧化酶（MnSOD）过表达在MSCs氧化损伤中的保护机制研究 制备不同浓度的三丁基过氧化氢（t-BHP）诱导的MSCs氧化损伤模型。相同浓度t-BHP诱导下， MnSOD-MSCs细胞凋亡总数明显低于GFP-MSCs组，MnSOD-MSCs的存活率明显高于GFP-MSCs，表明过表达MnSOD对t-BHP诱导的细胞的氧化应激损伤具有保护作用。实时定量PCR检测p53和PUMA的表达变化显示，在相同浓度下，MnSOD-MSCs中的p53和PUMA低于GFP-MSCs。Western blot结果显示，MnSOD能下调p53和PUMA蛋白的表达。（4）CXCR4-MSCs细胞在胃癌前病变-胃癌模型大鼠体内定植. 将CXCR4-MSCs注射入胃癌前病变-胃癌大鼠模型，观察CXCR4红色荧光在CXCR4-MSCs处理组的表达情况，同时行相关冰冻切片HE染色,结果表明仅有萎缩、肠上皮化生、异型增生的实验大鼠胃组织无CXCR4-MSCs阳性表达。而病理背景提示有胃癌形成的实验大鼠胃组织可见CXCR4红色荧光表达，且每个定植部位在400X视野下能看到有6-8个CXCR4-MSCs细胞团表达。.科学意义: 本研究为MSCs对于胃黏膜损伤以及癌前病变修复和逆转过程中可能具有潜在的应用价值提供了初步的实验学依据。.