microRNA-143/145调控Th9细胞抑制恶性腹腔积液的机制研究

Th9 cells promote the development of malignant ascites (MA); miR-143/145 present low expression in MA and they participate the regulation of some Th cells. Currently, little is known about the relationship of miR-143/145 and Th9 cells and their role in MA. Our preliminary experiment suggested that miR-143/145 is critical in the regulation of Th9 cells and may play important role in the development of MA. However, the exact mechanism of this role has yet to elucidate. Therefore, we hypothesis that miR-143/145 suppress the development of MA through the regulation of Th9 cells. In order to validate this hypothesis, we will use Th9 cells from mice, hepatocellular carcinoma cell lines, MA model, and the methods such as real-time PCR, Western-blot, Lipofectamine transfection, siRNA, to explore the role of miR-143/145 in MA, and verify the mechanism of miR-143/145 suppress the development of MA through regulation of Th9 cells from the levels of molecule, cells, tissue and animal model. Our study will give an insight into the mechanism of miR-143/145 suppress MA through the regulation of Th9 cells, and provide new idea for the treatment of MA.

Th9细胞促进恶性腹腔积液(MA)中发展，miR-143/145在MA中呈低表达并参与一些Th细胞的调控。迄今对miR-143/145与Th9细胞的关系及其在MA中作用机制仍知之甚少。我们预实验结果提示miR-143/145在Th9细胞调控和MA发展中起重要作用。但其作用机制还有待进一步探讨。为此，我们提出假说：miR-143/145可能通过调控Th9细胞影响MA发生发展。为了验证这一假说，我们将通过小鼠Th9细胞，肝癌细胞、MA模型，采用real-time PCR、Western-blot、脂质体转染、RNA干扰等手段，从分子、细胞、组织以及动物整体水平等多方面探讨miR-143/145在MA发生中的重要作用，明确miR-143/145通过调控Th9细胞影响MA发生发展的机制。本研究将从miR-143/145这个新视点为揭示调控Th9细胞对MA作用的机制，为MA防治提供新的思路。

Th9细胞促进恶性腹腔积液(MA)中发展，miR-143/145在MA中呈低表达并参与一些Th细胞的调控。迄今对miR-143/145与Th9细胞的关系及其在MA中作用机制仍知之甚少。本研究通过临床标本、细胞实验以及腹水瘤小鼠模型来探索miR-143/145调控Th9细胞抑制MA的机制。本研究临床标本的结果显示：Th9细胞、Th17细胞及其效应分子在MA患者中升高，它们可能参与了MA的形成且可能存在协同作用；MA中Th9细胞数量与患者生存期存在负相关关系，Th9细胞高比例组患者的死亡风险比是Th9细胞低比例组患者的2倍。miR-143/145在MA中表达明显降低，且两者表达量存在正相关关系，提示miR-143/145可能抑制MA的形成。体外实验的结果表明：上调miR-143/145水平可显著抑制Th9细胞的分化、增值，促进Th9细胞凋亡，抑制IL-9 mRNA的表达以及IL-9的分泌，而这种作用是通过靶向抑制NFATc1的表达而实现的。miR-145还可通过PI3K/Akt/mTOR/p70S6K/HIF-1α途径抑制Th9细胞极化。IL-9具有促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的作用，这种作用是通过激活JAK2/STAT3信号通路从而促进通路下游分子MMP-2、MMP-9、VEGF的表达实现的。动物实验的结果表明，肝癌MA模型组小鼠脾脏miR-145表达显著降低，Th9细胞及IL-9升高，p-PI3K、p-Akt、mTOR、p-mTOR、p-P70S6K、HIF-1α表达水平均明显升高；过表达miR-145的肝癌MA模型小鼠脾脏Th9细胞及IL-9显著降低，腹水体积明显减少，生存时间延长，这种作用是通过抑制PI3K/Akt/mTOR/p70S6K/HIF-1α通路的激活，从而抑制肝癌腹水模型Th9细胞的表达实现的。综上所述，本研究表明，Th9细胞及miR-143/145在MA形成发生和发展过程中起重要作用，miR-143/145通过靶向作用NFATc1抑制Th9细胞诱导分化，而miR-145还能通过抑制PI3K/Akt/mTOR/p70S6K/HIF-1α通路抑制Th9细胞生成从而影响MA的转归；IL-9可以通过激活JAK2/STAT3信号通路促进肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。因此，以miR-143/145调控Th9细胞对MA作用为靶点，可为MA防治提供新的思路。