Wnt信号通路对AML分化的影响及机制研究

急性髓性白血病（AML）是造血干/祖细胞发生分化阻滞和恶性增殖导致的恶性疾患，目前治疗包括化疗和诱导分化治疗。与传统化疗比较，诱导分化治疗完全缓解率高，毒副作用小，因此研发能够诱导AML细胞分化的分子靶点意义重大。Wnt信号通路是进化过程中高度保守的信号系统。有研究表明，Wnt信号通路与AML的发生发展有关，但目前还没有Wnt信号通路与AML细胞分化相关的报道。我们前期工作发现，一种新型化合物在诱导AML细胞分化的同时能够调节Wnt信号通路分子的表达。部分经典Wnt/β-catenin分子表达下调而非经典Wnt/Ca++/PKC通路分子表达上调，提示Wnt信号通路分子可能参与AML细胞的分化。本研究拟通过分子生物学技术对两种Wnt信号通路进行干预，观测对AML细胞分化的影响。明确不同Wnt信号通路与AML细胞分化的关系，找到与AML细胞分化相关的分子靶点，为AML的诱导分化治疗提供实验依据

我们前期工作发现，一种新型化合物 6-BT在诱导AML细胞分化的同时能够调节Wnt信号通路分子的表达，提示Wnt信号通路分子可能参与AML细胞的分化。在本课题我们分别研究了经典及非经典Wnt信号通路对粒细胞分化的影响，以期发现对AML细胞分化有显著影响的分子，为AML的诱导分化治疗提供实验室基础。我们发现非经典Wnt信号配体分子Wnt5a在AML病人中表达明显下调。通过稳筛过表达Wnt5a的NB4细胞，发现Wnt5a可上调PKC 及CAMKⅡ的磷酸化水平，激活非经典Wnt信号通路。但形态学及NBT-reduction试验均显示Wnt5a对NB4细胞粒单系分化的影响不显著，机制有待于进一步研究。 接着我们研究了经典Wnt信号通路受体分子FZD7对粒细胞分化的影响。我们构建并包装FZD7慢病毒，我们发现FZD7可上调NFATc1及经典Wnt通路的分子，提高经典Wnt通路的中心分子β-catenin的蛋白表达水平。在Imatinib 诱导的K562细胞分化过程中，FZD7表达下调。而且，过表达FZD7可拮抗Imatinib诱导的K562向红系分化，提示经典Wnt信号通路在细胞的分化中起拮抗作用。FZD7及其所调节的经典Wnt信号对AML细胞分化的影响正在研究过程中。在查阅大量文献后，我们发现靶向wnt信号分子的microRNA同样参与了AML的粒系、单核系分化。在保证顺利完成原定工作的基础上，我们利用现有资源对microRNA在AML的 作用进行分化过程中的作用了研究，发现miR-23a及miR-27a在PMA诱导的单核细胞分化及 ATRA诱导的粒系分化过程中上调，其共同的靶基因为GSK3β。下调GSK3β可促进AML细胞 向髓系分化，因此GSK3β可以作为AML诱导分化治疗的靶向分子。目前，已有4篇受本课题资助的SCI论文发表，另有3篇正在投稿、资料整理过程中。