基于肾阳虚体质研究少、长、壮、老肾阳盛衰的基因调控

前自然基金4320例肾阳虚证流行病学调查发现肾阳虚证症状、体征均存在年龄差异，老年与青年肾阳虚证转录组谱同中有异；故提出"肾阳虚证宏观表征下的生物学基础与年龄相关"的假说，开展时间序列的动态研究。基于前期肾阳虚代谢、免疫等基因模块，Wnt等信号通路研究基础，设计15K×8（15000点）肾阳虚证定制芯片（Agilent公司）。经社区健康档案筛查，纳入少、长、壮、老4个年龄组男性肾阳虚体质者与健康平和质者，经基因芯片检测，横向比较各年龄组肾阳虚体质之间、健康平和质之间，纵向比较同龄肾阳虚体质者与平和质之间、各年龄组肾阳虚体质者与全体平和质之间基因表达水平差异，采用Co-Expression Network算法等对海量数据进行生物信息融合。并经RT-PCR验证，探讨伴随机体少、长、壮、老，肾中阳气盛衰变化的基因调控模式，为肾藏象理论内涵提供新的科学依据，为临床疾病防治与养生保健提供重要参考。

本项目通过文献研究，梳理了体质的发展脉络和理论框架，并结合前期肾阳虚研究，依据中华中医药学会阳虚体质分类标准，制定了22条肾阳虚体质评价量表；按此标准纳入3组肾阳虚体质样本：少（0-10岁）,壮（29-39岁），老（60-70岁），及3组同年龄段阴阳平和体质样本，采用Agilent人全基因组芯片（4*44K），开展3个年龄段肾阳虚体质差异基因表达谱研究，经组间共同差异表达基因筛选、基因功能分类、分子通路分析、GO分析、共表达差异基因网络构建等方法，以及半定量RT-PCR的验证，发现肾阳虚体质各年龄组差异基因表达有显著差异，儿童组集中体现在肾阳虚对造血系统的影响，壮年组集中体现在肾阳虚对细胞生长与增殖相关的功能存在影响，老年组则集中体现在肾阳虚对生殖系统功能的抑制，而将各年龄组进行整体分析，则集中体现在能量合成及代谢功能与肾阳虚的发生有紧密联系。对老龄肾阳虚组开展半定量RT-PCR验证，提示dyx1c1、frat2、map2k6三条基因在肾阳虚组中的表达水平均呈下调趋势；同时采用结合重亚硫酸盐测序（BSP）法，开展了老龄肾阳虚免疫相关基因与其启动子区CpG岛甲基化水平的关联研究，提示wnt5、frat2、map2k6基因启动子区甲基化水平增高可能导致其基因表达水平降低，与肾阳虚体质状态相关。研究部分揭示和论证了肾阳虚体质的生物学基础存在年龄差异，各年龄段的基因调控模式有异，为临床分龄防治肾阳虚体质提供了依据和参考。