用改良T-DNA标签法克隆番茄抗枯萎病基因I-3的研究

番茄枯萎病菌小种3是番茄生产的巨大潜在危害，在精细定位专化性抗病基因I-3及克隆到其相应病原菌无毒基因AvrSIX1的前期工作基础上，本研究拟用改良T-DNA标签法克隆I-3基因。将AvrSIX1和绿色荧光蛋白基因GFP连接到T-DNA中，构建表达载体并用发根农杆菌介导转化抗、感番茄杂种F1，利用"基因对基因"特异互作原理筛选得到因抗病基因被插入破坏而能存活的突变体，利用Tail-PCR得到T-DNA的旁邻序列；根据功能预测、次级渐渗系快速定位及RT-PCR检测抗、感材料差异表达的结果，确定候选抗病基因片段；在经RNA干涉方法进行功能验证后用快速扩增cDNA末端方法得到全长基因；通过与已克隆的I-2基因序列比较，分析出现专化性抗性的分子机理。研究结果将为育种实践提供指导，并丰富维管束病害抗性分子机理理论；同时，发展的改良T-DNA标签法也为克隆其他抗病基因提供参考。