NF-kB p65/miR-23a-27a-24-2 cluster负反馈调控异常在低分化胃腺癌发生及红系分化障碍中作用的研究

本课题组在国际上首次报道miR-24异常导致红细胞膜特有的带3蛋白在K562中表达障碍、在胃癌细胞内翻译开启并分别与 K562分化障碍、胃癌发生相关。进一步研究发现miR-23a-27a-24-2与NF-kB p65存在负反馈调控，在低分化胃腺癌及K562细胞中NF-kB p65表达反向改变导致该负反馈调控异常。本课题将从检测胃癌组织中红系系列蛋白表达入手，采用动物模型、生物信息学及分子生物学技术，研究NF-kB p65/miR-23a-27a-24-2负反馈通路异常在低分化胃腺癌发生及红系分化障碍中的作用，同时探索这一通路上游NF-kB p65变化的原因。以上研究将阐明同一信号通路在低分化胃腺癌及红系分化障碍中的反向作用，揭示胃癌发生的新机制，为胃癌的骨髓细胞来源提供实验依据。

本项目圆满完成预期计划并有新的科学发现：.一、发现红细胞功能蛋白质组（erythroid protein,EP）是P65/miR-23a-27a-24的靶标。发现P65通过启动子强力上调miR-23a-27a-24表达，miR-23a-27a-24靶向红细胞26种功能蛋白质，抑制其表达。进一步研究发现ERK通过磷酸化P65，增强其稳定性，从而上调P65/miR-23a-27a-24。由此建立了新的ERK/P65/miR-.23a-27a-24/EP分子调控通路。.二、ERK/P65/miR-23a-27a-24/EP通路调控异常是白血病和低分化胃癌发生的关键分子事件.1. 在白血病发生中的作用。体外研究发现 P65/miR-23a-27a-24水平与红细胞的终末分化呈负相关，P65/miR-23a-27a-24在多类型白血病细胞分化后表达水平降低，抑制P65/miR-23a-27a-24表达可以促进白血病细胞分化，过表达miR-23a-27a-24会增加白血病细胞浸润。P65抑制剂可以延长白血病小鼠的生存期、促进白血病细胞分化以及减少肿瘤肝脏浸润。.2. 在低分化胃癌发生中的作用。与白血病发生相反，我们发现，ERK/P65/miR- 23a-27a-24通路的表达水平在低分化胃癌细胞内显著降低，使其对红细胞功能蛋白质表达的抑制作用被解除，红细胞功能蛋白质在胃癌细胞内大量表达。胃泌素降低了HP诱发小鼠胃癌的发生率，同时上调E RK/P65/miRNA表达，进一步证明ERK/P65/miRNA/EP通路异常是低分化胃癌发生的关键分子事件。.三、胃泌素与曲妥珠单抗协同作用抑制HER2阴性胃癌细胞增殖.本项目研究发现，胃泌素通过胃泌素受体CCKBR途径，与曲妥珠单抗发挥协同作用，对HER2阴性胃癌细胞也显示明显抑制作用，胃泌素是候选抗胃癌靶向药物。.四、胃泌素通过阻断EGR1/AE2/p16/p-ERK抑制结肠癌细胞增殖.本项目发现了EGR1/AE2/p16/p-ERK信号通路，该通路在结肠癌细胞内被异常激活，胃泌素通过抑制这一通路抑制结肠癌细胞增殖。.以上研究成果获2013年度上海市科学进步2等奖、教育部自然科学二等奖。胃泌素的抗胃癌作用获国家发明专利授权。该项目实施过程中培发表SCI论文8篇，培养6名博士、1名硕士完成了学位论文。