胆管细胞与成纤维细胞旁分泌在移植肝缺血型胆管病的实验研究

移植肝缺血型胆管病是指肝移植术后出现的弥漫性或局灶性胆管树狭窄/扩张、毁损/减少等病变。胆管细胞的损伤和病理性修复、以及大、中胆管的纤维化性改建是移植肝缺血型胆管病重要的病理学特征和发病基础。本研究针对移植物胆管纤维化的关键-成纤维细胞持续活化、转化为肌纤维母细胞的病理生理环节，揭示胆管细胞和成纤维细胞的旁分泌是肌纤维母细胞持续增加、胆管纤维化性改建的驱动因素；深入阐述胆管细胞分泌的5-羟色胺和成纤维细胞来源的转化生长因子-beta1是实现该旁分泌效应的主要手段；评价早期应用抗转化生长因子-beta1抗体来干扰胆管细胞和成纤维细胞的旁分泌环路、以阻止成纤维细胞向肌纤维母细胞的持续转化，从而预防移植物胆管纤维化及狭窄的可行性。为临床设计移植物胆管病的系统防治提供理论基础及实验依据，进一步可为原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎等其它胆道疾病提供新的治疗思路，具有较广泛的临床应用前景。

缺血型胆管病是导致移植肝功能丧失和受者死亡的重要原因，而供肝冷缺血时间延长是肝移植术后NAS的风险因素。研究证实门管成纤维细胞（portal fibroblasts, PFs）向肌纤维母细胞（myofibroblasts, MFs）的大量转化是介导胆汁性肝纤维化的主要机制，PFs在邻近肝门区域大量分布，此处也是肝移植术后NAS的多发部位。由此可见抑制PFs向MFs的过多转化，从而减轻胆管周围MFs收缩导致的胆管纤维化性改建，是防治肝移植术后胆管纤维化或胆管狭窄的靶点之一。胆管上皮细胞（biliary epithelia cells, BECs，BECs）与肝内间质细胞之间的交互作用与胆管病密切相关，这一点在本研究中BECs和PFs的单独培养或二者的混合培养体系中得以证实：增殖的BECs分泌5-羟色胺（5-HT），通过PFs表达的5-HT2受体A亚型（5-HTR2A）激活细胞内TGF-1/smad通路，促进PFs增殖并向MFs的转化；后者分泌的TGF-1抑制BECs上5-HTR1A/1B的表达，从而削弱5-HT固有的抑制BECs增殖效应，维持细胞增殖。进一步的，本研究在大鼠原位肝移植模型基础上证实了上述BECs与PFs之间的交互作用与肝移植术后胆管周围MFs聚集、胆源性肝纤维化进展密切相关。指出肝移植术后在多种机制作用下，PFs所处微环境中5-HT含量增加，通过与PFs上的5-HTR2A结合，促进PFs向MFs转化并聚集于胆管周围，细胞外基质成分以及促纤维化相关因子表达增加，导致胆源性肝纤维化进展，而5-HTR2A拮抗剂则显著缓解上述现象。本研究为肝移植术后缺血型胆病的发病机制提供了研究思路，提示5-HT2A受体可能成为肝移植术后缺血型胆管纤维化的干预靶点，进一步可拓展到原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎等其它胆道疾病的防治体系，具有较广泛的临床应用前景。更深入的研究需要关注5-HTR2A拮抗剂干预治疗的时机以及最优化的给药方案，从而为防治NAS这一被称为肝移植术后“阿喀琉斯之踵”的并发症，为“边缘供肝”术后患者的长期存活提供可行性策略。