miR-29b在缺血性脑卒中的作用及机制研究

The prevalence and mortality of cerebral ischemic stroke are increasing rapidly worldwide. Economic serum biomarkers are lacking in clinic. MicroRNA is a kind of endogenous small non coding RNA molecules which excited in multi-organism and regulated gene expression. miR-29b has been suggested to correlate with acute cerebral ischemic stroke, but the underline mechanism remains elusive. In the present study, we are to determine the effect of miR-29b on neuron apoptosis. Hypoxia reoxygenation model in cells and acute cerebral ischemic animal are the main pathological models. We will use both in vitro and in vivo experiments coming with inhibitor and agonist of miR-29b for the detrimental roles of miR-29b on neuron apoptosis. We will further to analysis the relation of the serum level of miR-29b and the prognosis, neuron defect and cerebral metabolism in patients with cerebral ischemic stroke. This study would provide new insight into the mechanism of cerebral ischemic stroke and novel treatment and serum biomarkers for cerebral ischemic stroke. miR-29b might be used as the biomarkers for diagnosis, therapy and prognosis assessment.

缺血性卒中有着较高的患病率及病死率。目前缺乏临床实用性的血清生物标记物和新的治疗方法。微小RNA(microRNA, miR)是一类存在于多种生物体中可调控基因表达的内源性非编码小分子RNA。miR-29b最近被认为与急性缺血性脑卒中有关，但是具体的机制未明。本研究拟通过建立缺氧/复氧损伤的细胞损伤模型和急性脑缺血动物模型，采用抑制或激动miR-29b的手段，明确miR-29b参与缺血性脑卒中的机制是否与其调节细神经细胞凋亡有关，并且在临床上分析血清miR-29b水平，与缺血性脑卒中患者预后，神经功能缺损和脑细胞代谢的关系。本项目的意义在于进一步阐明缺血性脑卒中的发病机制，寻找新的治疗靶点和生物标记物，为将miR-29b作为诊断，治疗和预后评估指标提供依据。

脑卒中是引起死亡的第三大原因和导致残疾的主要原因，脑卒中大多数为缺血性卒中，颅内出血和蛛网膜下腔出血占15%。目前脑卒中治疗的主要问题是无效再通和有害再通，而再通主要是由缺血再灌注损伤所引起。miR-29b 最近被认为与急性缺血性脑卒中有关，但是具体的机制未明。. 本项目通过应用神经细胞株N2a及SK-N-SH，构建氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)模型，模拟体外脑缺血损伤，进行miR- 29b的体外实验，检测细胞凋亡、活性、凋亡蛋白等指标，初步阐述miR- 29b在缺血性脑卒中的作用机制。结果显示：经 OGD/R 处理的细胞中 miR-29b 水平明显降低。 miR-29b 激动剂显著增加细胞活力，减少 LDH 漏出率，改善细胞核在凋亡过程中形态学变化，增强 OGD/R 条件下 caspase-3 活性; miR-29b 抑制剂加剧 OGD/R 诱导的细胞毒性和细胞凋亡。 miR-29b 激动剂阻断 OGD/R 诱导的 Bax 和 p53 蛋白表达增加，降低 Bcl-2 蛋白表达;miR-29b 抑制剂加剧 OGD/诱导的这些凋亡相关蛋白改变。 p53 基因敲除的 p53 siRNA 降低细胞活力，增加 LDH 漏出率，逆转 miR-29b 激动剂对细胞损伤的改善作用。 miR-29b在大脑缺血再灌注中其表达将会上调，同时外源性表达miR-29b可促进神经细胞的凋亡，更为重要的是其促进细胞凋亡的作用主要是通过下调mcl-1，它是bcl-2家族蛋白中促进细胞存活的蛋白.miR-29家族对细胞增殖、细胞周期、衰老、分化、凋亡、转移等有调节作用，且急性脑缺血大鼠脑部miR-29b表达明显增高，并可能与其调节神经元细胞的凋亡有关。. 本项目进一步阐明miR-29b在缺血脑卒中的作用及机制，为寻找新的治疗靶点和生物标记提供依据。