VitaminA-Smad7-uPA-TK基因复合物调控HSC治疗肝硬化的实验研究

In China，morbidity and mortality of cirrhosis are always high due to prevalent virus hepatitis.Present studies show: hepatic stellate cells（HSCs） activation is the cytological basis of hepatic fibrosis.Activated HSCs are main cells for synthetizing extracellular matrix(ECM). Activated HSCs are also central node resulting in hepatic fibrosis.Based on previous study that lipid mesenchymal stem cell graft treated cirrhosis,we will construct recombinant Cre/LoxP eukarya vector,wrap the vector in vit A-liposome complex, and then inject the complex in liver by hepatic portal vein to target to transfect HSCs.This mehod will block HSCs to sythesize collagen and degrade ECM by regulating Smad7, u-PA, TK, and HGF expression,which can kill control1edly HSCs、reduce collagen and degrade fibre to promote hepatic cell regeneration and rebuild hepatic tissue.We hope to explore a non-routine、good effect and prospective therapy. So,this study has an important theoretical significance and potential application value.

病毒性肝炎的广泛流行，导致我国肝硬化的患病率和死亡率长期居高不下。研究表明：肝星状细胞(HSCs)活化是肝纤维化/肝硬化发生的细胞学基础，活化的HSCs是合成细胞外基质(ECM)的主要场所，是导致肝纤维化/肝硬化发生诸多因素共同的中心环节。我们的前期研究发现，通过调控Smad7蛋白的表达可以有效地降低HSCs胶原的合成，据此我们充分利用HSCs对维生素A、脂质体的特异性摄取特性，将Smad7调控蛋白及uPA、TK等调控基因包裹于维生素A-脂质体内，经门静脉注射于肝脏，使其靶向转染于HSCs，在阻断胶原合成的同时增强它们对ECM的降解，可控性地杀灭HSCs以减少活化HSCs的数量，进而降解已经形成的纤维化组织，促进肝细胞再生和肝脏组织结构的重建。本研究将对进一步阐明肝硬化的发病机制及其HSCs的作用有重要意义，有望为肝硬化的治疗策略提供新的思路，因此具有较大的理论研究意义和潜在的应用价值。

本研究我们对该项目完成以下内容：.（1） 成功构建了肝星状细胞靶向基因表达载体（COL-Cre、LNL-GFP、LNL-Smad7、LNL-u-PA、LNL-HGF、LNL-TK）；.（2） 以不同浓度分别共转染正常鼠肾细胞(Normal Rat Kidney，NRK)，摸索最佳转染浓度并鉴定转染后的蛋白表达；.（3） 成功制备出“维生素A-脂质体-基因”复合物：{Ⅰ：VA-lip-（COL-Cre，LNL-GFP），Ⅱ：VA-lip-（COL-Cre，LNL-Smad7），Ⅲ：VA-lip-（COL-Cre，LNL-uPA），Ⅳ：VA-lip-（COL-Cre，LNL-HGF），Ⅴ：VA-lip-（COL-Cre，LNL-TK）}；.（4） 验证了视黄醇结合蛋白（Retinol Binding Protcin,RBP）与“维生素A-脂质体-基因”复合物的特异性结合并分离纯化。