针刺通过KATP通道影响PI3K/Akt传导通路对抗脑缺血再灌注损伤的细胞电生理机制

Acupuncture has obvious curative effect against cerebral ischemia reperfusion injury. Studies found that ATP-sensitive potassium (KATP) channel may serve as an important target in mediating acupuncture effect against hypoxic-ischemic brain damage. KATP channel opening can make neuronal excitability decreased to antagonize cell apoptosis effectively in hypoxia or ischemic injury of the brain tissue. Specific action links and signal pathway mechanisms relevant to KATP channel opening against apoptosis modulated by acupuncture are not clear. Studies had shown that KATP channel openers may have an important protective effect on myocardial ischemia through PI3K/Akt pathway. This study intends to investigate the brain protective effect of acupuncture from the KATP channel characteristics. Focal cerebral ischemia/reperfusion (MCAO/R) rats will be intervened by electro-acupuncturing Neiguan (PC6), Renzhong (DU26) & Sanyinjiao (SP26). An important role KATP channels opening plays in acupuncture against apoptosis will be investigated from the aspects of the volume of cerebral infarction, the rate of apoptosis and the expression of PI3K/Akt signaling pathway with the help of KATP channel opener and blocking agent. Single cell patch clamp technique will be used to observe the effect of acupuncture on KATP electro-physiological properties in order to verify the acupuncture mechanism in reducing the volume of cerebral infarction and reducing apoptosis by means of regulating KATP channel to activate PI3K/Akt signaling pathway and more abundant experimental evidences will be provided for the treatment of cerebral ischemia reperfusion injury.

针刺对抗脑缺血再灌注损伤疗效肯定。研究发现，ATP敏感性钾（KATP）通道可能作为重要的作用靶点介导了针刺对抗脑缺氧缺血损伤。在脑组织低氧或缺血性损伤时，KATP通道开放可使神经元兴奋性降低，有效地对抗细胞凋亡的发生。但有关针刺调节KATP通道开放对抗凋亡发生的具体作用环节及信号通路机制尚不明确。有研究显示KATP通道开放剂可能通过PI3K/Akt通路对心肌缺血起保护作用。本研究拟从KATP通道特性方面考察针刺的脑保护作用。采用电针内关、人中、三阴交穴干预局灶性脑缺血/再灌注（MCAO/R）模型，借助KATP通道激动剂和阻断剂，从脑梗死体积、细胞凋亡率、PI3K/Akt信号通路表达等方面考察KATP通道开放影响针刺抗凋亡发生的重要作用，并采用膜片钳技术观测针刺对海马神经元KATP通道电生理特性的影响，验证针刺通过调节KATP通道开放激活PI3K/Akt信号通路，减轻凋亡发生的作用机制。

研究背景：针刺对抗脑缺血再灌注损伤疗效肯定。研究发现，ATP敏感性钾（KATP）通道可能作为重要的作用靶点介导了针刺对抗脑缺氧缺血损伤。在脑组织低氧或缺血性损伤时，KATP通道开放可使神经元兴奋性降低，有效地对抗细胞凋亡的发生。但有关针刺调节KATP通道开放对抗凋亡发生的具体作用环节及信号通路机制尚不明确。有研究显示KATP通道开放剂可能通过PI3K/Akt通路对心肌缺血起保护作用。本研究拟从KATP通道特性方面考察针刺的脑保护作用。.研究内容：本研究采用电针内关、人中、三阴交穴干预局灶性脑缺血/再灌注（MCAO/R）模型，借助KATP通道激动剂和阻断剂，从脑梗死体积、细胞凋亡率、PI3K/Akt信号通路表达等方面考察KATP通道开放影响针刺抗凋亡发生的重要作用，并采用膜片钳技术观测针刺对海马神经元KATP通道电生理特性的影响。.研究结果：电针组神经功能评分明显高于模型组（P＜0.01），脑梗死体积及海马神经细胞总凋亡率明显低于模型组（均P＜0.05），电针组Bcl-2蛋白表达、Bcl-2/Bax比值较模型组均明显升高（P＜0.05，P＜0.01），Bax蛋白表达较模型组明显降低（P＜0.01）；与电针组比较，电针+KATP阻滞剂组大鼠神经功能评分明显降低（P＜0.05），海马神经细胞总凋亡率明显升高（P＜0.05），海马组织Bcl-2蛋白表达明显降低（P＜0.05），Bax 蛋白表达明显升高（P＜0.05）。电生理特性方面，模型组海马锥体神经元KATP 通道开放时间、开放概率均明显高于空白组、假手术组（均P＜0.01），电流幅度与空白组、假手术组比较均无统计学差异（均P＞0.05）；电针组海马锥体神经元KATP通道开放时间、开放概率均明显低于模型组（均P＜0.01），电流幅度与模型组比较无统计学差异（P＞0.05）.科学意义：本研究进一步验证了“醒脑开窍”针刺法通过调节KATP通道开放激活PI3K/Akt信号通路，减轻凋亡发生的作用机制。为“醒脑开窍”针刺法治疗缺血性脑血管病的临床推广，提供了科学依据。