基于HLA-Ⅱ相关遗传易感基因研究肾虚证HBV持续感染的机制

乙肝病毒（HBV）持续感染易引起肝硬化、诱发肝癌，是医学界的研究难题。由慢性乙肝补肾法的广泛运用和从温病"肾虚邪伏"伏气理论认识治疗该病的研究进展，说明肾虚感邪导致邪气"伏藏"是影响HBV持续感染的重要因素。但目前对"肾虚邪伏"影响HBV感染的机理研究不深入。而阐明肾虚证HBV持续感染的病机实质，有助于制定针对该证HBV感染慢性化的早期预警、早期干预等防治策略，提高临床疗效，具有重要学术和临床价值。因此，本课题结合与HBV持续感染密切相关的遗传易感基因，提出肾虚证HBV持续感染可能与人类白细胞抗原Ⅱ（HLA-Ⅱ）及有关因子密切相关的假说。拟运用PCR-SSP、RT-PCR、ELISA等方法，研究慢性乙肝肾虚证（肾阴虚、肾阳虚）的HLA-DRB1和DQB1基因及INF-γ、IL-4、IL-10等的表达特征，并结合病毒标志物等因素，探索乙肝肾虚证"肾虚邪伏"影响HBV持续感染的生物学机制。

本课题基于影响HBV持续感染的证候病理机制进行深层次研究，研究HBV持续感染的病机实质，有重要的学术价值；并对制定针对性强的慢性HBV感染防治方案以及早期预警等，有重要的实用价值。研究首先对HBV慢性感染的证候学特征进行流行病学研究，得出肾虚与肝郁脾虚和湿热证都是HBV慢性感染的重要常见证候，而他们与家族聚焦感染密切相关。本课题结合与HBV持续感染密切相关的易感基因HLA，运用DNA测序分型（PCR-SBT）法，对HLA-DQB1及HLA-DRB1基因座位分型，运用ELISA方法检测INF-γ、IL-4、IL-10等因子，分析HLA高分辨等位基因及相关因子与肾虚HBV慢性感染的关系，研究发现肾阳虚组中DQB1*03:02:01、DRB1*03:01:01:01与无症状组比较有显著性差异（P＜0.05）；DRB1*03:01:01:01可能与肾阳虚型慢性乙肝关系密切（OR=3.65,95%可信区间为1.04-12.79）；肾阴虚证患者IL-10，IL-4，INF-γ水平较无症状及肾阳虚组明显低(p<0.05)。对肾阴虚患者HLA-DQB1及HLA-DRB1基因座位的精确分型得出DQB1*05:01:01:01、DRB1*01:01:01两位点与该证型关系密切，可能与肾阴虚患者免疫应答异常存在相关性，这一遗传特征相关性值得进一步探索。同时，研究显示，慢性乙型肝炎肾阳虚证与ALT、AST、HBV DNA及TBIL存在一定的相关性。研究运用基因芯片技术（Agilent miRNA芯片）对慢性HBV感染代表证候脾胃湿热证、肝郁脾虚证的microRNA表达特征进行探索研究，结果显示该两证间及与正常人比较，都存在显著性差异microRNA谱；对其靶基因预测分析，显示两证与正常人的差异表达microRNA可能调节蛋白质合成、酶活性、人体免疫系统发展与进程、生物的合成、细胞发育等，与肌动蛋白、白细胞介素-12、鸟氨酸脱羧酶等有关；两证间差异表达的microRNA（谱）为hsa-miR-1273g-3p、hsa-miR-197-5p、hsa-miR-5703等，可能与蛋白质的合成、激素的代谢有关。