腺病毒核心蛋白遗传标记方法的建立及其应用研究

腺病毒的标记方法大概分为两大类即化学标记与遗传标记，对研究腺病毒感染机制及动物体内腺病毒的追踪过程具有重要的意义。同化学标记方法相比较，遗传标记具有标记效率高及标记后病毒活力高等明显的优点。目前腺病毒的遗传标记主要是采用对腺病毒衣壳蛋进行遗传标记，如pIX蛋白的荧光遗传标记。在病毒染细胞后，所标记的衣壳蛋白将会脱落，因此对腺病毒衣壳蛋进行遗传标记的方法将无法追踪病毒进入细胞核内的过程。腺病毒的核心蛋白一直伴随病毒感染的整个过程，因此研究腺病毒核心蛋白的遗传标记无疑具有重要的意义。本研究在基因组水平对腺病毒核心蛋白（如pVII）进行荧光遗传标记，由此建立一种新的腺病毒遗传标记方法。然后在此基础上，将所建立的新方法分别用于knob修饰的腺病毒体外感染过程及条件复制型溶瘤腺病毒在动物体内肿瘤中的示踪研究。目前有关腺病毒核心蛋白遗传标记方法及其相关研究还未见有报道，因此本研究具有明显的创新性。

腺病毒的标记方法大概分为两大类即化学标记与遗传标记，对研究腺病毒感染机制及动物体内腺病毒的追踪过程具有非常重要的意义。同化学标记方法相比较，遗传标记具有标记效率高及标记后病毒活力高等明显的优点。目前腺病毒的遗传标记主要是采用对腺病毒衣壳蛋白进行遗传标记。在病毒感染细胞后，所标记的衣壳蛋白将会脱落，因此对腺病毒衣壳蛋白进行遗传标记的方法无法追踪病毒进入细胞核内的过程。腺病毒的核心蛋白一直伴随病毒感染的过程，因此研究腺病毒核心蛋白的遗传标记无疑具有重要意义。. 本项目在基因组水平对腺病毒核心蛋白进行荧光遗传标记，主要完成了以下科研内容：1.成功构建了荧光蛋白标记腺病毒蛋白穿梭载体；2.成功构建了荧光蛋白标记腺病毒蛋白腺病毒载体；3.成功制备和纯化了多种将荧光蛋白标记衣壳蛋白pIX或核心蛋白pVII的病毒颗粒；4.进行了荧光蛋白标记腺病毒颗粒的相应体内、外实验研究。项目执行期间，发表SCI文章12篇，SCIE文章1篇，核心文章9篇，重要文章13篇。申请专利9项，获得授权专利6项。培养在读博士生8名，在读硕士研究生17名，培养毕业博士后2名，毕业博士生4人，毕业硕士研究生13人。课题通过采用蓝白斑筛选的方法在腺病毒载体基因组的同源重组区域引入单一酶切位点，从而提高同源重组的效率，进而加速了人们对腺病毒衣壳蛋白pIX或核心蛋白pVII进行荧光蛋白标记的腺病毒载体的构建，具有明显的特色和创新性。同时，国内外目前缺乏有关在基因水平对腺病毒载体的核心蛋白进行遗传标记的研究报道，通过本项目的研究，为knob修饰腺病毒感染机制的基础研究及溶瘤腺病毒在临床治疗安全性研究提供了条件及理论依据，具有重大的理论意义和实际应用价值。