INTS10蛋白通过RLR通路抑制乙型肝炎病毒复制的分子机制研究

Hepatitis B virus infection is a global problem of public health. Persistence HBV infection, may cause liver cell damage and liver fibrosis, which develop into cirrhosis and hepatocellular carcinoma. RIG-I like receptors（RLR）plays an important role in inhibiting HBV infection. Our previous studies found that INTS10 is a candidate gene with susceptivity to chronic HBV infection and INTS10 inhibits the accumulation of intracellular HBV replicative intermediates and expression levels of HBV RNA. INTS10 up-regulates p-IRF3 and actives IFN-λ and interacts with YAP1. In this research, we will clarify the function of INTS10 in inhibiting HBV replication, determine the molecular mechanism of INTS10 in regulating RLR through interaction with YAP1, and analyze the molecular mechanism of INTS10 in inhibiting HBV replication through RLR. This research will provide experimental basis for clarifying the molecular regulation mechanisms of generation and progression of HBV infection.

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染是一个全球性的公共卫生健康问题。HBV感染的慢性化（持续性感染）有可能引起肝细胞持续性损害和肝纤维化，进一步发展成为肝硬化和肝细胞癌。RIG-I样受体（RLR）在抑制HBV感染过程中发挥重要作用。本室前期研究发现INTS10基因是HBV持续性感染的候选易感基因，INTS10过表达抑制HepG2.2.15细胞中HBV复制。INTS10可激活RLR通路中的IRF3和IFN-λ，另外INTS10可以与YAP1相互作用。本项目拟在此基础上，明确INTS10抑制HBV复制的功能；确定INTS10通过与YAP1相互作用调控RLR信号通路的分子机制；解析INTS10通过RLR抑制HBV复制的分子机制。为进一步阐明HBV持续性感染的分子调控机制和寻找HBV持续性感染治疗的分子靶标提供重要的实验依据。

乙型肝炎病毒（HBV）感染是一种常见的传染病，HBV的持续性感染或HBV的清除是受病毒、环境和遗传等因素影响的。为了检测并发现持续性HBV感染的新的易感性位点，本室前期针对 HBV 持续性感染开展了一项大规模的全基因组关联研究（Genome-wide association study，GWAS），发现人类染色体 8p21.3 区域的rs7000921是 HBV 持续性感染的易感基因组区域，INTS10 基因是 HBV 持续性感染的候选易感基因。临床相关性分析也发现INTS10的低表达与HBV的持续性感染密切相关。为了验证INTS10是抑制HBV感染的基因这一假设，我们研究了INTS10对肝细胞系中和HBV慢性感染小鼠中HBV复制的影响。首先，在感染了pAAV-HBV1.2质粒地HepG2、L-02细胞和HepG2.2.15细胞中干扰INTS10的表达后检测HBV复制相关指标发现INTS10抑制了HBV的复制。其次，我们构建了肝脏特异性敲除Ints10基因的C57BL/6J小鼠，尾静脉高压注射pAAV-HBV1.2质粒构建了HBV慢性感染小鼠模型，发现Ints10基因敲除后HBV的清除效率更低。为了探究INTS10抑制HBV复制的机制，我们首先通过IP/MS、co-IP、GST pullwon、蔗糖密度梯度离心等实验证实INTS10与TFAP4的DNA结合domain直接相互作用，并依赖TFAP4发挥抑制HBV复制的功能。其次，通过RNA seq、ChIP seq、双荧光素酶报告基因、EMSA等实验发现INTS10与TFAP4的DNA结合domain相互作用抑制了TFAP4对AKT1的转录调控，并依赖AKT1发挥抑制HBV复制的功能。最后，我们研究发现INTS10通过AKT1抑制cGAS的磷酸化，激活cGAS-STING-IRF3-IFNs信号通路。上游调控机制研究发现，rs7000921的功能性SNP是rs12543862，且发现rs12543862通过CTCF远程调控INTS10的转录。我们的研究揭示了机体抗HBV复制的一个可能的新机制，为HBV相关肝病的防治提供了新的线索。