干细胞转录因子Sox2与宫颈癌发生发展关系及其机制研究

Sox2是迄今人们发现最早、也是最重要的维持胚胎干细胞（ES）多潜能性和自我更新的关键基因。最近越来越多的研究表明，Sox2在成体组织及肿瘤组织中表达，可能参与肿瘤的发生发展。我们的前期研究表明，Sox2蛋白在宫颈原位癌、宫颈浸润癌中表达明显高于在正常宫颈组织中的表达；在宫颈鳞癌中其表达随病理分级的增加而升高。在宫颈癌细胞系中高表达Sox2后， HeLa、SiHa细胞系的细胞增殖能力、克隆形成率及成瘤性均高于对照组。这些结果均提示Sox2在宫颈癌的发生发展中发挥重要作用，但其下游调节的具体靶分子或信号通路尚未明确，因此有必要对其作用机制做了深一步的研究。本项目旨在通过对Sox2与细胞周期、WNT信号通路的相互作用的研究，试图阐明Sox2在宫颈癌中的作用机制，并为开辟宫颈癌个性化基因治疗提供理论基础。

本研究采用免疫组化、细胞转染、Real-time PCR、Western Blotting、荧光素酶报告基因载体等分子生物学、流式细胞仪等手段，在离体组织、细胞及动物实验的水平，对Sox2在宫颈癌发生发展中的机制做了初步探讨，主要结果如下：1). Sox2仅在部分正常宫颈基底膜上表达，在宫颈鳞癌组织中高表达，且随鳞癌病理分级升高而表达增强；在晚期宫颈癌患者(III、Ⅳ期)中，Sox2表达高的患者预后明显较差，但Sox2表达同患者年龄、临床分期、淋巴结转移无相关性；2）在宫颈癌SiHa细胞中高表达Sox2后发现，SiHa-Sox2的增殖速度明显快于SiHa-EGFP细胞；细胞周期结果示SiHa-Sox2细胞的S期比例明显增高，差异具有统计学意义（P<0.05）。进一步研究分析表明，在宫颈癌中，Sox2通过上调CyclinD1、下调p27Kip1蛋白的表达，加速宫颈鳞癌SiHa细胞的G1→S期转换进程，促进S期DNA合成，加快细胞周期进程以促进宫颈癌细胞的增殖；3）细胞划痕实验、Transwell小室及迁移实验表明，SiHa-Sox2细胞较SiHa-EGFP细胞的侵袭和迁移能力明显增强，提示Sox2促进宫颈癌SiHa细胞的侵袭及迁移；4）Wnt信号通路中的关键基因β-Catenin及C-myc在宫颈鳞癌组织中高表达，提示Wnt信号通路在宫颈癌中异常激活；5）在宫颈鳞癌中，Sox2的表达同β-Catenin、C-myc的表达均具有相关性。在宫颈癌细胞系中，通过上调或下调Sox2的表达，β-Catenin蛋白表达随之升高或降低；构建β-Catenin基因的promotor区荧光素酶报告基因载体，进一步研究提示Sox2可能同β-Catenin的promotor相结合，从而激活Wnt信号通路，促进宫颈癌的发生发展；6）在高表达Sox2的宫颈癌C33A细胞系中敲除Sox2后，细胞生长速度明显减慢，且对顺铂的化疗作用更为敏感，提示Sox2可能成为宫颈癌治疗的一个新靶点。