线粒体通透性转换在二硫化碳致男（雄）性生精细胞凋亡线粒体途径中的作用

生精细胞凋亡异常增多是CS2致雄性生殖系统损伤的重要原因之一。线粒体被视为细胞凋亡的关键元件，线粒体通透性转换（MPT）对维持线粒体正常功能尤为重要，其发生可能与CS2诱导的睾丸生精细胞凋亡密切相关，但其具体作用机制尚不清楚。本项目以CS2为受试物，将实验室研究与职业接触人群调查相结合，应用MPT开放剂和抑制剂对其开放进行双向调控，采用免疫荧光、流式细胞术、高效液相色谱法、RT-PCR、Western blot等技术，探讨MPT在CS2诱导的生精细胞凋亡线粒体途径中的作用；并采集CS2职业接触人群精液样本，对精子线粒体结构功能进行检测，分析CS2对精子MPT的影响，及其与精子数量、质量、性激素水平以及睾丸功能之间的关系。通过对雄性生殖细胞MPT和线粒体凋亡途径的研究，丰富了对CS2致男（雄）性生殖损伤分子机制的认识，为保护职业人群，治疗及预防CS2生殖毒性、开发新的药物提供科学依据。

中文摘要.本项目通过职业人群调查及体内、体外动物实验，采用超微结构观察、免疫组化、ELISA、分子探针、荧光定量PCR、Western blot等技术，探讨线粒体通透性转换在CS2致男（雄）性生殖损伤机制中的作用。研究表明：（1）CS2可导致雄性大鼠睾丸组织宏观结构和超微结构的改变。(2) CS2可导致线粒体途径细胞凋亡相关基因和蛋白表达的改变，而且MPTP孔道调控蛋白表达亦显著降低，提示CS2可通过线粒体途径引发大鼠睾丸生精细胞发生凋亡，而线粒体通透性转换在其中起了重要作用。（3）CS2可造成睾丸caspase9/3酶活性上升，线粒体呼吸酶复合物水平升高。(4）MPTP抑制剂CSA能部分拮抗甚至扭转CS2造成的睾丸损伤，而LND则加重其作用。（5）CS2染毒后体外共培养大鼠支持-生精细胞形态变化明显，超微结构亦显著损伤；细胞存活率下降及凋亡率增高；线粒体凋亡途径相关基因mRNA及蛋白表达明显改变。（6）CS2暴露可导致接触男工性功能下降，精子数量、质量下降，性激素水平应激性改变。（7）CS2暴露可导致接触男工精子细胞DNA损伤，精液抗氧化能力、精子线粒体膜电位及通透性转换蛋白表达降低，细胞凋亡率升高、线粒体呼吸酶复合物II和IV表达增加。.关键词：二硫化碳；细胞凋亡；离子通透性转换孔；支持细胞