CD133阳性骨肉瘤细胞亚克隆在骨肉瘤肺转移中的作用及机制研究

骨肉瘤是最常见的原发性骨恶性肿瘤，预后差，肺转移是骨肉瘤病人死亡的主要原因。本项目组前期工作中发现经裸鼠尾静脉接种的骨肉瘤细胞株MG-63比Saos-2具有更强的肺部成瘤能力，并且干细胞表面分子标记物CD133在MG-63中有更高的阳性率。同时我们也在骨肉瘤病人的原发灶和肺转移灶中发现了CD133的表达。本项目拟：⑴进一步扩大标本量，探讨原发灶中CD133的阳性率与发生肺转移的时间和肺转移病灶数量间的关系；⑵通过免疫磁珠法分选出MG-63中的CD133阳性与阴性细胞，从细胞水平和动物体内实验探讨CD133阳性与阴性的骨肉瘤细胞在生物学性状、粘附、侵袭与运动能力、分化能力、体内接种肺转移能力上的区别；⑶通过检测β-catenin及其靶基因研究Wnt信号通路在CD133阳性骨肉瘤细胞肺转移中的作用。本研究从CD133这个新角度为骨肉瘤肺转移的机制研究提供新思路，为骨肉瘤的分子靶向治疗奠定基础。

本课题回顾性分析从2002-2010年间收入上海市第六人民医院并有骨肉瘤标本的病例79例，探讨原发灶中CD133,CD44的表达与肿瘤临床特征、生存时间以及肺转移的关系。通过免疫组化分析发现CD133和CD44的表达水平与肺转移密切相关，发生肺转移的骨肉瘤患者其CD133和CD44的表达明显高于未发生转移的骨肉瘤患者，同时CD133和CD44高表达者预后差。我们进一步从MG-63细胞株中通过免疫磁珠分离出CD133阳性和阴性的骨肉瘤细胞，通过细胞实验比较其克隆形成、分化、生长、侵袭和迁移能力；检测干细胞特性基因Oct-4， NANOG， CXCR4的mRNA的表达；将其分别接种裸鼠，比较其体外成瘤能力以及肺转移能力。通过以上体内体外实验，确证骨肉瘤中存在着的CD133阳性细胞为骨肉瘤干细胞，其中的CD133阳性亚群在骨肉瘤的转移中起着重要作用。本研究首次探讨骨肉瘤实体肿瘤中的骨肉瘤干细胞与骨肉瘤转移之间的关系，为骨肉瘤转移的研究提供了一个新的思路。