RGD肽表面修饰壳聚糖载Tie2启动子的sEphB4基因缓释纳米粒双重靶向作用CNV的应用基础研究

Our earlier work has proved that intravitreal injection of the lentiviral vector for EphB4 gene in mice may inhibit the formation of CNV by interruption of EphrinB2/EphB4 signal. This successive project is to demonstrate that sEphB4 could inhibit the growth of CNV by interruption EphrinB2/EphB4 signal. On this basis, RGD-peptides was immobilized on chitosan by chemical crosslinking．Plasmid pGCsi-Tie2/Neo/GFP/sEphB4 was encapsulated into Chitosan-RGD-nanoparticles by complex coacervation method．By the double targeted mechanism, one is RGD and the other is Tie2 promoter, the therapeutical effect of CH-RGD-pGCsi-Tie2/sEphB4 is evaluated.

本青年基金的前期工作主要验证了利用慢病毒载体敲减EphB4基因，阻断EphrinB2/EphB4接触信号之后，能够对小鼠脉络膜新生血管具有明显的抑制作用。提示阻断EphrinB2/EphB4信号通路能够抑制CNV的发生。本连续基金的主要设想是：在体外证明可溶性sEphB4能够阻断EphrinB2/EphB4信号通路，抑制CNV的发生发展。在此基础上，构建能够表达sEphB4的Tie2启动子质粒，包载壳聚糖纳米粒，同时对纳米粒进行RGD肽修饰，导向性结合脉络膜新生血管。除了局部组织靶向外，通过RGD肽对脉络膜微血管内皮细胞独特的亲和力作为一重靶向，同时通过Tie2启动子在脉络膜微血管内皮细胞上特异性启动转录sEphB4作为二重靶向，结合壳聚糖纳米粒的缓释作用，在体内观察对CNV的抑制作用。为CNV的治疗进行应用基础研究探索。

本研究的前期工作主要验证了利用慢病毒载体敲减EphB4基因，阻断EphrinB2/EphB4接触信号之后，能够对小鼠脉络膜新生血管具有明显的抑制作用。提示阻断EphrinB2/EphB4信号通路能够抑制CNV的发生。本研究在此基础上，在体外证明可溶性sEphB4能够阻断EphrinB2/EphB4信号通路，抑制CNV的发生发展。构建了能够表达sEphB4的Tie2启动子质粒，并包载壳聚糖纳米粒，同时对纳米粒进行RGD肽修饰，采用这种载体导向性结合脉络膜新生血管。除了局部组织靶向外，通过RGD肽对脉络膜微血管内皮细胞独特的亲和力作为一重靶向，同时通过Tie2启动子在脉络膜微血管内皮细胞上特异性启动转录sEphB4作为二重靶向，结合壳聚糖纳米粒的缓释作用，在体内观察对CNV的抑制作用。研究发现，通过双重靶向的CH-RGD-pGCsi-Tie2/sEphB4，能够抑制EphrinB2/EphB4接触性信号，从而有效抑制CNV的增殖。此研究为CNV的治疗进行了应用基础的研究探索，为CNV的临床治疗提供了可行的治疗策略。