特异性miRNA在MDS中的表达及其功能的初步研究

MDS是造血干细胞异常克隆性疾病，其确切的发病机制尚未明确。miRNA能够调控造血干细胞定向分化，在造血干细胞恶性克隆性疾病中起着重要作用。在国外MDS患者miRNA表达谱研究的基础上，本项目提出"MDS 发病过程中，存在特异性miRNAs的异常表达，作用于其靶基因，导致细胞的异常增殖和凋亡，可能是MDS发病的分子机制之一"的假说。本项目拟检测MDS各亚型患者骨髓CD34+细胞中miR-222、miR-181家族、miR-155、miR-150、miR-10a/b的表达；通过生物信息学技术及文献报道，预测miRNAs的作用靶点，鉴定与MDS细胞增殖和凋亡密切相关的靶基因；利用反义寡核苷酸技术，分别或组合阻滞miRNAs在MDS细胞株MUTZ-1中的表达，探讨miRNAs对细胞周期、增殖、凋亡的影响。研究结果对阐明MDS发病机制具有重要的理论意义，为临床寻找新的治疗靶点提供科学基础。

骨髓增生异常综合症 (MDS) 是一组起源于造血干细胞或多能干细胞的恶性克隆性疾病，具有向急性髓系白血病（AML）转化的高风险。微小RNA（miRNA)能调控造血干细胞定向分化潜能，在造血干细胞受损的疾病中发挥了重要的分子调控作用。我们推测miRNAs在MDS的发生发展中也可能发挥重要作用。我们首先利用miRNA芯片技术筛选MDS患者骨髓细胞特异性表达的miRNAs；后检测特异性miRNA及其靶基因在MDS患者骨髓细胞中的表达量，并与MDS患者的临床特征进行相关分析，初步探讨特异性miRNAs及其靶基因与MDS发生发展的关系；最后观察上调及下调miRNAs的表达水平对MDS细胞株增殖和凋亡的影响，初步探讨特异性miRNAs在MDS发生发展中的作用并利用双荧光素酶技术验证特异性miRNA的靶基因。我们在9例MDS患者中检测出376个差异表达的microRNAs，显著上调表达的miRNAs10个（差异倍数>5.0），下调表达的miRNAs9个（差异倍数<0.2）；其中miR-196b-5p在所有MDS患者骨髓中表达水平均升高，在低危+中危-1组中的表达水平是正常对照组的2.9倍，在中危-2+高危组（不包括转白病例）中达到8.0倍，在MDS转白组中则达到了11.4倍（P值均<0.05），miR-196b-5p的表达量与患者骨髓原始细胞比值呈正相关（r = 0.673，P<0.01）；我们共预测出miR-196b-5p的靶基因125个，DICER1的表达量与miR-196b-5p表达量呈负相关（r=-0.862，P<0.05)；在上调miR-196b-5p的表达后MDS-L细胞的增殖明显增加、凋亡减少（P ＜0.05）；下调miR-196b-5p表达则出现细胞增殖减少、凋亡增加（P ＜0.05）；经双荧光素酶实验验证,DICER1是miR-196-5p的靶基因。 本课题的研究结果表明：在MDS患者骨髓细胞中存在特异性表达的miRNAs；miR-196b-5p可能通过调控DICER1,在MDS的发生发展中发挥重要作用；miR-196b-5p有可能成为预测MDS向白血病转化的新的生物学指标，本课题对完善MDS发生发展的机制具有重要的理论意义。